ブタ幹細胞と初期化関連因子を用いたクローニングの効率化に関する研究

猪干细胞高效克隆及重编程相关因子研究

基本信息

批准号：
14F04086
负责人：
加藤容子
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04086/
关键词：
体細胞核移植ブタ初期化 PHA 核移植幹細胞体外培養クローン

项目摘要

ブタではヒトの臓器移植を目指した研究が多く、現在では畜産分野への貢献を目指した体細胞核移植研究は少ない。そのため、ウシやマウスとは異なり、核移植のドナーとして用いる細胞の種類と核移植卵の発生能とを結びつける系統立てた情報は少ない。そこで、本研究では、ブタで様々な組織から細胞を採取し適切な培養法を検討し、それらを用いて核移植を行い、発生能を検討する。これらの知見を得て、最終目的としてブタ体細胞核移植実験系の改善を目指す。H27年度に、海外特別研究員は、本人にとって全く新しい技術である、哺乳動物卵子・初期胚の取り扱い、体外成熟培養、単為発生、核移植、リアルタイムPCRによる遺伝子発現の検討などを順調に習得したので、H2７年度はブタ体細胞核移植の体外発生能向上を目指した研究を実施した。すなわち、体細胞核移植卵の活性化方法の検討、ドナー細胞核の除核レシピエント卵への導入方法の検討、ドナー細胞種の影響；特に幹細胞の有用性の検討、培養方法を検討した。その結果、活性化方法、ドナー核の導入方法では、検討したいずれの方法でも、胚盤胞への発生率、胚盤胞の細胞数に大差はみられなかった。また、ドナー細胞としてブタiPS細胞を用いても、体外発生能や細胞数は、体細胞を用いた場合と比較して大差が見られなかったことから、幹細胞であっても卵子細胞質内で生じる初期化が強く促進されるわけではないと示唆された。培養培地にPHAを添加したところ、体外発生率が増加する傾向がみられた。

猪的大部分研究都是针对人体器官移植，目前很少有旨在为畜牧业做出贡献的体细胞核移植研究。因此，与牛和小鼠不同，几乎没有系统信息将用作核移植供体的细胞类型与核移植卵的发育潜力联系起来。因此，在本研究中，我们将从猪的各种组织中收集细胞，检查适当的培养方法，使用它们进行核移植，并检查它们的发育潜力。有了这些发现，最终的目标是完善猪体细胞核移植实验体系。 2017财年，这位海外特聘研究员成功掌握了对他来说全新的技术，例如处理哺乳动物卵子和早期胚胎、体外成熟培养、孤雌生殖、核移植以及使用实时PCR检查基因表达。，我们进行了旨在提高猪体细胞核移植体外发育潜力的研究。具体来说，我们研究了体细胞核移植卵的激活方法、将供体细胞核引入去核受体卵的方法、供体细胞类型的影响，特别是干细胞的有用性以及培养方法。结果，在活化方法和供体核导入方法中，胚泡发育速度或胚泡细胞数没有显着差异。此外，即使使用猪iPS细胞作为供体细胞，与使用体细胞时相比，体外发育潜力或细胞数量也没有显着差异，这表明甚至在卵母细胞的细胞质内产生了干细胞。不大力提倡初始化。当培养基中添加PHA时，体外发病率有增加的趋势。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Evaluation of the impact of pre-exposure to PHA on developmental efficiency of porcine SCNT embryos

评估预暴露于PHA对猪SCNT胚胎发育效率的影响

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
May Sann Aung;Hiroshi Masuda;Takanori Kobayashi;Hiromi Nakanishi;Takashi Yamakawa;Naoko K. Nishizawa.;Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）
通讯作者：
Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）

Development of porcine cloned embryos produced using fibroblast and porcine induced pluripotent stem cells as nuclei donor cell types

使用成纤维细胞和猪诱导多能干细胞作为核供体细胞类型产生猪克隆胚胎的发育

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
May Sann Aung;Hiroshi Masuda;Takanori Kobayashi;Hiromi Nakanishi;Takashi Yamakawa;Naoko K. Nishizawa.;Ndubuisi Samuel MACHEBE et al(計８名）;Ndubuisi Samuel Machebe et al（計９名）
通讯作者：
Ndubuisi Samuel Machebe et al（計９名）