細胞核の初期化に関する研究

细胞核重编程研究

基本信息

批准号：
14034259
负责人：
加藤容子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,体細胞核移植をより確実な技術にすること,また,核移植を介さない細胞の初期化法を確立することを最終目的として実施した。すなわち,卵子に含まれる初期化因子の実体を探るとともに,初期割球や培養細胞を様々な角度から受精卵に近付ける工夫を行なった。また,現在の体細胞核移植法では,クローン胚の発生率が低く,高頻度で死亡することから,正常に発生するための工夫を行なった。本年度は以下の実験を行なった。ウシMII期末受精卵に電気刺激による活性化刺激を付与し,電気刺激を与えていない卵子と与えた卵子との間で,予備的に2次元電気泳動をおこない,タンパクレベルでの差異がみられるかどうかを条件設定した。その結果,20個の卵子を用いて,差異のあるスポットを検出することができた。マウスMII期の卵子の回収率の高いタンパク採取法について検討した100個のMII期卵子の透明帯を除去し,その後,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファ,(2)界面活性剤や還元剤を含むバッファ,(3)より強力な界面活性剤や還元剤を含むバッファで可溶化した上清を2次元電気泳動に供した。その結果,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファで処理した場合に解析可能なスポットを複数見つけることができた。現在は,ウシとマウスの卵子を用い,活性化を付与したものと付与しないものとの間におけるタンパクレベルの差異をより詳細に検討中である。

这项研究的最终目的是使体细胞核转移成为更可靠的技术，并建立了一种不介导核转移的细胞的方法。换句话说，我们研究了鸡蛋中包含的重编程因子的实质，并努力从各个角度使初始胚泡和培养的细胞更接近受精卵。此外，当前的体细胞核转移方法的克隆胚胎发生率较低，并且经常被杀死，以确保正常发生。今年，进行了以下实验。通过电刺激给出了对相结尾受精的牛MII卵的激活刺激，并在未给出电刺激的卵和给定的卵之间初步进行2D电泳，并设置了条件以确定是否观察到蛋白质水平的差异。结果，使用20个卵来检测不同的斑点。 The zona pellucidation of 100 MII stage eggs, which were studied for a protein collection method with a high recovery rate of mouse MII stage eggs, was removed, and then supernatants solubilized in (1) a buffer that does not contain surfactants or reducing agents, (2) a buffer that contains surfactants or reducing agents, and (3) a buffer that contains more potent surfactants or reducing对药物进行二维电泳。结果，在用不含表面活性剂或还原剂的缓冲液处理时，可以找到可以分析的多个斑点。目前，我们正在更详细地考虑使用牛和小鼠卵激活和没有激活的蛋白质水平的差异。