細胞核の初期化に関する研究

细胞核重编程研究

基本信息

批准号：
14034259
负责人：
加藤容子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,体細胞核移植をより確実な技術にすること,また,核移植を介さない細胞の初期化法を確立することを最終目的として実施した。すなわち,卵子に含まれる初期化因子の実体を探るとともに,初期割球や培養細胞を様々な角度から受精卵に近付ける工夫を行なった。また,現在の体細胞核移植法では,クローン胚の発生率が低く,高頻度で死亡することから,正常に発生するための工夫を行なった。本年度は以下の実験を行なった。ウシMII期末受精卵に電気刺激による活性化刺激を付与し,電気刺激を与えていない卵子と与えた卵子との間で,予備的に2次元電気泳動をおこない,タンパクレベルでの差異がみられるかどうかを条件設定した。その結果,20個の卵子を用いて,差異のあるスポットを検出することができた。マウスMII期の卵子の回収率の高いタンパク採取法について検討した100個のMII期卵子の透明帯を除去し,その後,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファ,(2)界面活性剤や還元剤を含むバッファ,(3)より強力な界面活性剤や還元剤を含むバッファで可溶化した上清を2次元電気泳動に供した。その結果,(1)界面活性剤や還元剤を含まないバッファで処理した場合に解析可能なスポットを複数見つけることができた。現在は,ウシとマウスの卵子を用い,活性化を付与したものと付与しないものとの間におけるタンパクレベルの差異をより詳細に検討中である。

本研究的最终目标是使体细胞核移植成为一种更可靠的技术，并建立一种不涉及核移植的细胞重编程方法。换句话说，我们研究了卵子中所含的重编程因子的实质，并设计了从各种角度接近受精卵与初始卵裂球和培养细胞的方法。另外，目前的体细胞核移植方法，克隆胚胎的发生率较低，而且死亡频繁发生，所以我们想出了一些方法来保证正常发育。今年，我们进行了以下实验。通过电刺激对牛MII期受精卵进行活化刺激，对未电刺激的卵和已给予电刺激的卵进行初步二维电泳，观察蛋白质水平的差异。我设定了一个条件，是否可以。结果，我们能够使用 20 个鸡蛋检测到不同的斑点。我们研究了一种对小鼠 MII 期卵具有高回收率的蛋白质收集方法。我们从 100 个 MII 期卵中去除透明带，然后使用 (1) 不含表面活性剂或还原剂的缓冲液，以及 (2) 表面活性剂将上清液溶解在含有去污剂和还原剂的缓冲液中，以及(3)含有更强的去污剂和还原剂的缓冲液。将上清液进行二维电泳。结果，(1) 我们发现了多个点，当用不含表面活性剂或还原剂的缓冲液处理时可以进行分析。目前，我们正在使用牛卵和小鼠卵，更详细地研究激活和未激活卵之间蛋白质水平的差异。