体細胞を用いた新しい個体作出法に関する基礎的研究

利用体细胞产生个体新方法的基础研究

• 批准号: 11480250
• 负责人: 加藤 容子
• 金额: $ 5.76万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11480250/
• 关键词: 体細胞; 核移植; 初期化因子; 全能性

マウス未受精卵細胞質中には,体細胞核を初期化する因子が含まれていると考えられるが,人為的に活性化処理を施すと,この初期化作用は消失する。そこで,活性化処理を付与した卵子と付与していない卵子との間で,発現している遺伝子の差違を調べるため,differential display法を試みた。まず,予備実験として,マウス細胞に有効なDifferential display法のプライマーについて検討した。3種類のoligo-d(T)primerを用いて,cDNAを合成し,PCRでは20種類の任意プライマーを用い,マウス細胞で増幅しやすいものを選別した。また,RIを用いる実験系と非RIの実験系でDNAフラグメントの検出程度を比較した。その結果,非RI系の実験系においても比較できる程度の検出が可能であることが明らかとなった。また,できる限り細胞数を少なくして解析するため,卵子数の検討を行ったところ,10個程度であれば,比較できるプライマーの組み合わせが20組程度できることが明らかとなった。

人们认为，未受精小鼠卵的细胞质中含有对体细胞核进行重编程的因子，但当采用人工激活处理时，这种重编程效应就会消失。因此，我们尝试采用差异显示方法来研究经过活化处理的鸡蛋与未经活化处理的鸡蛋之间表达基因的差异。首先，作为初步实验，我们研究了对小鼠细胞有效的差异显示方法的引物。使用3种oligo-d(T)引物合成cDNA，并在PCR中使用20种任意引物，选择易于在小鼠细胞中扩增的引物。我们还比较了基于 RI 的实验系统和非基于 RI 的实验系统之间 DNA 片段的检测程度。结果表明，即使在非 RI 实验系统中，也可以实现相当水平的检测。此外，为了使用尽可能少的细胞进行分析，我们调查了卵母细胞的数量，发现如果使用大约10个卵母细胞，我们可以制作大约20个可进行比较的引物组合。

项目成果

Amano,T et al.,: "Production of mice derived entirely from embryonic stem cells after injecting the cells into heat treated blastocysts"Theriogenology. 53. 1449-1458 (2000)

Amano,T 等人：“将细胞注射到热处理的囊胚中后，完全由胚胎干细胞产生小鼠”Theriogenology。

Y.Kato et.al.: "Developmental potential of mouse follicalar epithelial cells and cumulus cells after nuclear transfer"Biology of Reproduction. 61. 1110-1114 (1999)

Y.Kato 等人：“核移植后小鼠滤泡上皮细胞和卵丘细胞的发育潜力”生殖生物学。

Y.Kato et.al.: "Developmental potential of mouse primordial germ cells"Development. 126. 1823-1832 (1999)

Y.Kato 等人：“小鼠原始生殖细胞的发育潜力”开发。

Yabuuchi,A., et al.,: "Nuclear transfer of mouse follicular epithelial cells pretreated with spermine protamine, or putrescine"J.Exp.Zool.. 289. 208-212 (2001)

Yabuuchi,A., et al.，：“用精胺鱼精蛋白或腐胺预处理的小鼠滤泡上皮细胞的核转移”J.Exp.Zool.. 289. 208-212 (2001)

Amano,T., et al.,: "Mouse cloned from embryonic stem (ES) cells synchronized in metaphase with nocodazole"J.Exp.Zool.. 289. 139-145 (2001)

Amano,T., et al.，：“用诺考达唑从胚胎干 (ES) 细胞克隆中期同步的小鼠”J.Exp.Zool.. 289. 139-145 (2001)