透明メダカを用いた心筋再生の定量的評価系の開発

透明青鳉心肌再生定量评价系统的开发

基本信息

批准号：
20650059
负责人：
大石勲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

小型魚類メダカ及びゼブラフィッシュを用いて心筋細胞の可視化と定量評価系の開発を試みた。メダカmlc2a遺伝子の上流1.2kbおよび2.0kbを単離し、蛍光分子Kaede遺伝子の上流に配置し、これを透明メダカに遺伝子導入した。1.2kbを有するトランスジェニックメダカは心筋特異的に蛍光分子を発現するが、心筋全体で均一には発現せず、再生研究に用いるには不適であった。2.0kbを有するメダカは現在スクリーニング中である。メダカmlc2a上流領域2.0kb,1.2kbいずれのベクターもゼブラフィッシュ胚に顕微注射した際には心筋特異的かつメダカよりも広範にKaede遺伝子の発現を誘導しており、メダカでのmlc2aの発現はゼブラフィッシュよりも厳密に制御されている可能性が考えられる。一方、ゼブラフィッシュのmlc2a上流領域にKaede蛍光分子を誘導させるトランスジェニックゼブラフィッシュの作製を行い、心筋細胞特異的に蛍光分子を発現する個体を得た。このトランスジェニックフィッシュの成魚を開胸し、紫外線照射により緑色から赤色変光後、タングステン針で傷をつけ、強緑色-弱赤色の再生心筋の発生を経時的に検討した。その結果、損傷後14日で明瞭な強緑色-弱赤色の再生心筋を再現性良く認めるとともに、FGFシグナルの抑制による心筋再生の抑制とFGF添加による心筋再生の増進を認めた。このことは新たに心筋再生の定量評価系を樹立したことに留まらず、心筋再生制御とその評価系を開発したという点で非常に大きな意義を持つと考えられる。

我们试图可视化心肌细胞，并使用小型鱼类Medaka和斑马鱼开发定量评估系统。分离出1.2kb和2.0kb上游的Medaka MLC2A基因，放置在荧光分子Kaede基因的上游，并将其引入透明的Medaka。具有1.2kb的转基因Medaka专门表达荧光分子，但在整个心脏肌肉中并不均匀表达，并且不适合再生研究。目前，具有2.0KB的Medaka正在筛选。 MEDAKA MLC2A上游区域2.0KB，1.2KB载体和1.2KB载体是心肌肌肉特有的，并且诱导Kaede Gene的表达比Medaka的表达，并且MEDAKA在MEDAKA中的表达是严格控制的。另一方面，产生了斑马鱼MLC2A上游区域中的Kaede荧光分子的转基因斑马鱼，并产生了一个专门表达荧光分子的个体。将这种转基因鱼成人鱼打开，在绿色的绿色向红光发红之后，它用钨针刮擦，随着时间的流逝，检查了强烈的绿红色再生肌肉的发生。结果，在损坏后14天重新创建了清晰重新培养的强绿色湿润再生肌肉，并抑制了FGF信号，并通过添加FGF来改善心肌噬菌体。这被认为非常重要，因为它已新建立了一种用于心肌康复的定量评估系统，但也开发了心肌康复控制及其评估系统。