透明メダカを用いた心筋再生の定量的評価系の開発

透明青鳉心肌再生定量评价系统的开发

基本信息

批准号：
20650059
负责人：
大石勲
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

小型魚類メダカ及びゼブラフィッシュを用いて心筋細胞の可視化と定量評価系の開発を試みた。メダカmlc2a遺伝子の上流1.2kbおよび2.0kbを単離し、蛍光分子Kaede遺伝子の上流に配置し、これを透明メダカに遺伝子導入した。1.2kbを有するトランスジェニックメダカは心筋特異的に蛍光分子を発現するが、心筋全体で均一には発現せず、再生研究に用いるには不適であった。2.0kbを有するメダカは現在スクリーニング中である。メダカmlc2a上流領域2.0kb,1.2kbいずれのベクターもゼブラフィッシュ胚に顕微注射した際には心筋特異的かつメダカよりも広範にKaede遺伝子の発現を誘導しており、メダカでのmlc2aの発現はゼブラフィッシュよりも厳密に制御されている可能性が考えられる。一方、ゼブラフィッシュのmlc2a上流領域にKaede蛍光分子を誘導させるトランスジェニックゼブラフィッシュの作製を行い、心筋細胞特異的に蛍光分子を発現する個体を得た。このトランスジェニックフィッシュの成魚を開胸し、紫外線照射により緑色から赤色変光後、タングステン針で傷をつけ、強緑色-弱赤色の再生心筋の発生を経時的に検討した。その結果、損傷後14日で明瞭な強緑色-弱赤色の再生心筋を再現性良く認めるとともに、FGFシグナルの抑制による心筋再生の抑制とFGF添加による心筋再生の増進を認めた。このことは新たに心筋再生の定量評価系を樹立したことに留まらず、心筋再生制御とその評価系を開発したという点で非常に大きな意義を持つと考えられる。

我们试图可视化心肌细胞，并使用小型鱼类Medaka和斑马鱼开发定量评估系统。分离Medaka MLC2A基因上游的1.2 kb和2.0 kb，放置在荧光分子Kaede基因上游，并将基因转移到透明的Medaka中。具有1.2 kb的转基因MEDAKA在心肌中表达荧光分子，但它们在整个心肌中并不均匀地表达它们，这使得它们不适合在再生研究中使用。目前，具有2.0 KB的Medaka正在筛选。 Medaka Mlc2a 2.0 Kb和1.2 Kb诱导的Kaede基因表达的斑马鱼胚胎中的两个向量在心肌方面是特异性的，并且比Medaka更广泛，并且MEDAKA中MLC2A在MEDAKA中的表达可能比Zebrafish更严格控制。同时，产生了转基因斑马鱼，其中在斑马鱼的MLC2A的上游区域诱导了Kaede荧光分子，并获得了在心肌细胞中特别表达荧光分子的个体。打开成年的转基因鱼，然后通过紫外线辐射将绿色变成红色，然后用钨针刮擦，随着时间的推移，检查了强绿色红色再生的心肌。结果，在受伤后14天观察到明显，强烈的绿色红色再生心肌，并且观察到，通过抑制FGF信号抑制心肌再生，而增加FGF会增强心肌再生。人们认为这对于心肌再生的新定量评估系统以及心肌再生的心肌再生控制和评估系统的发展具有重要意义。