発生過程におけるRorファミリー受容体型チロシンキナーゼの機能解析

Ror家族受体酪氨酸激酶发育过程中的功能分析

• 批准号: 12770073
• 负责人: 大石 勲
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770073/
• 关键词: 受容体型チロシンキナーゼ; ノックアウトマウス; Ror; 形態形成; Wnt; 神経堤細胞; 間葉系細胞; シグナル伝達; 受容体; チロシンキナーゼ; Ror1; Ror2; 骨軟骨形成

Rorファミリー受容体型チロシンキナーゼ(RTKs)は構造の類似した2つのメンバー(Ror1,Ror2)から成り、発生過程におけるパターン形成、特に骨軟骨、心・大血管、肺形成といった多様な局面において機能する極めて重要な分子である。しかし、その重要性にも関わらず、Ror1,Ror2は共にリガンドが同定されておらず、シグナル伝達機構についてもほとんど不明であった。本年度、我々はマウス胚発生過程におけるRor1,Ror2の発現動態を詳細に検討すると共に、Ror2のリガンドの探索およびRor2を介するシグナル伝達機構の解明を試みた。マウス胚発生過程においてRor1,Ror2は神経堤細胞、間葉系細胞を中心に発現が認められ、Ror1,Ror2のノックアウトマウスを用いた組織学的解析結果と併せて、Ror1,Ror2は神経堤細胞や間葉系細胞の増殖、移動、分化の過程に関与し、形態形成を制御することが強く示唆された。また、RorRTKsは細胞外領域にWntの受容体であるFrizzledのWnt結合部位と相同性の高いドメイン(CRD)を有しており、Wnt若しくはWnt様のタンパク質がリガンドであることが期待されていたが、我々は、Ror2ノックアウトマウスの表現型がWnt5aノックアウトマウスの表現型と著しく類似することや、Ror2の細胞外領域がWnt5aとin vitroで会合し得ること、その会合にRor2のCRDが必要であることを明らかにし、Wnt5aとRor2がリガンド・レセプターの関係にあることが強く示唆された。加えて、Ror2の細胞内領域にWntシグナル伝達の制御因子であるDishevelled, CKIεが物理的に会合し、Ror2の活性化を誘導すること等を明らかにし、Ror2がWnt5aの受容体複合体の構成要素として、Wnt5aによるシグナル伝達系を制御する可能性が示唆された。

Ror家族受体酪氨酸激酶（RTK）由两个结构相似的成员（Ror1和Ror2）组成，是极其重要的分子，在发育过程中模式形成的各个方面发挥作用，特别是骨软骨、心脏/大血管和肺形成。它是一个重要的分子。然而，尽管它们很重要，但尚未鉴定出 Ror1 或 Ror2 的配体，并且信号转导机制仍然很大程度上未知。今年，我们详细研究了Ror1和Ror2在小鼠胚胎发育过程中的表达动态，寻找Ror2配体，并试图阐明Ror2介导的信号转导机制。在小鼠胚胎发育过程中，Ror1和Ror2主要在神经嵴细胞和间充质细胞中表达，从使用Ror1和Ror2敲除小鼠的组织学分析结果来看，Ror1和Ror2主要在神经嵴细胞和间充质细胞中表达。强烈表明该蛋白参与间充质细胞的增殖、迁移和分化过程并控制形态发生。此外，RorRTK 的胞外区有一个与 Wnt 受体 Frizzled 的 Wnt 结合位点高度同源的结构域 (CRD)，并且预计 Wnt 或 Wnt 样蛋白将成为配体。发现Ror2敲除小鼠的表型与Wnt5a敲除小鼠惊人相似，并且Ror2的胞外区域与Wnt5a相互作用。我们证明Wnt5a和Ror2可以在体外结合，并且Ror2的CRD是这种结合所必需的，强烈表明Wnt5a和Ror2具有配体-受体关系。此外，我们还发现，Disheveled 和 CKIε 是 Wnt 信号传导的调节因子，与 Ror2 的细胞内区域物理相关，并诱导 Ror2 激活，这表明 Wnt5a 控制信号转导系统的可能性是一个因素。

项目成果

Iwai K.: "Physical interactions of Dmnk with Orb : implications in the regulated localization of Orb by Dmnk during oogenesis and embryogenesis"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 290. 225-229 (2002)

Iwai K.：“Dmnk 与 Orb 的物理相互作用：在卵子发生和胚胎发生过程中 Dmnk 对 Orb 调节定位的影响”Biochem。

Oishi I.: "Critical Role of Caenorhabditis elegans Homologs of Cds1 (Chk2)-Related Kinases in Meiotic Recombination"Molecular and Cellular Biology. 21巻4号. 1329-1335 (2001)

Oishi I.：“Cds1 (Chk2) 相关激酶的秀丽隐杆线虫同源物在减数分裂重组中的关键作用”，《分子和细胞生物学》，第 21 卷，第 4 期，1329-1335 (2001)。

Oishi I: "Critical Role of Caenorhabditis elegans Homologs of Cds1 (Chk2)-Related Kinases in Meiotic Recombination"Mol. Cell. Biol.. 21. 1329-1335 (2001)

Oishi I：“Cds1 (Chk2) 相关激酶在减数分裂重组中的秀丽隐杆线虫同源物的关键作用”Mol。

Matsuda T: "Expression of the tyrosine kinase genes, Ror1 and Ror2, during mouse development"Mech. Dev. 105. 153-156 (2001)

Matsuda T：“小鼠发育过程中酪氨酸激酶基因 Ror1 和 Ror2 的表达”Mech。

Nomi M.: "Loss of mRor1 enhances the heart and skeletal abnormalities in mRor2 deficient mice : redundant and pleiotropic functions of mRor1 and mRor2 receptor tyrosine kinases"Mol. Cell. Biol.. 21. 8329-8335 (2001)

Nomi M.：“mRor1 缺失会增强 mRor2 缺陷小鼠的心脏和骨骼异常：mRor1 和 mRor2 受体酪氨酸激酶的冗余和多效性功能”Mol。