高感度質量分析法による皮膚疾患バイオマーカーの網羅的探索

使用高灵敏度质谱全面搜索皮肤病生物标志物

基本信息

批准号：
24591628
负责人：
橋本公二
金额：
$ 3.49万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、尋常性乾癬の新たなバイオマーカーを、高感度質量分析法を用いて網羅的に検索し、乾癬の診断、重症度、薬剤の効果判定に用いることである。また同様のストラテジーで湿疹の代表的疾患であるアトピー性皮膚炎においてもバイオマーカー探索を行い、診断、重症度、薬剤の効果判定に有用であることを示す。本年度は書面にて同意の得られた患者さんから血液を3ml採取し、血清分離後凍結保存を行った。同時に尿、汗も回収し(3ml)凍結保存した。対照として健常人のサンプルの収集を開始した。目標症例各疾患50例、正常人50例のうちアトピー性皮膚炎5例、尋常性乾癬2例、正常人12例のサンプルを回収することができた。安定同位体で標識した各疾患特異的ヒトタンパク質ライフブラリーの構築コムギ胚芽インビトロタンパク質合成技術を用いて、同位体標識タンパク質ライブラリーの作成を行った。膜貫通型タンパク質の合成には、リポソームを利用する無細胞タンパク質合成技術を用い、同位体標識タンパク質の作成には、安定同位体で標識したL-アミノ酸リジン(L-Lys-13C615N2)とアルギニン(L-Arg-13C615N4)を使用した。全ての合成タンパク質はTIPsタグにより濃度を500 fmol/μl に補正した後、低吸着マイクロチューブへ分注し、内部標準用試料として-80度で保存・管理を行った。SIRPL基本ライブラリー用合成候補としてインターロイキンおよびその受容体、インターフェロンおよびその受容体、ケモカインおよびその受容体、その他のサイトカインおよびその受容体、造血因子およびその受容体、細胞傷害因子およびその受容体、細胞増殖因子およびその受容体、ADAMメタロプロテアーゼ、MT-MMPおよびMPメタロプロテアーゼとその阻害因子TIMP、オーファン受容体も含む各種GPCR、細胞外マトリックス、がん遺伝子、がん抑制遺伝子など約800種類を目標とし合成を開始している。

这项研究的目的是使用高灵敏度质谱法全面地搜索斑块牛皮癣的新生物标志物，并使用它们来诊断牛皮癣，严重性和药物疗效。此外，类似的策略还涉及生物标志物搜索特应性皮炎，这是一种典型的湿疹疾病，并表明它对于诊断，严重性和药物疗效确定很有用。今年，从已获得书面同意的患者中收集了3毫升的血液，血清分离后，将血液保存在冷冻保存中。同时，收集尿液和汗液（3ml）并冷冻。作为对照，开始了健康个体的样本。我们能够收集每种疾病50例的样本，50例正常患者，5例特应性皮炎，2例斑块牛皮癣和12例正常患者。使用稳定同位素标记的疾病特异性人蛋白质寿命模糊了同位素标记的蛋白质库，该蛋白质库是使用小麦胚芽中的体外蛋白质合成技术制备的。使用脂质体的无细胞蛋白质合成技术用于跨膜蛋白的合成，以及稳定的同位素标记的L-氨基酸赖氨酸（L-LYS-13C615N2）和精氨酸（L-ARG-13C615N4）的合成。使用TIPS标签将所有合成蛋白校正至500 fmol/μL的浓度，然后分配到低吸附的微管中，并以-80°C作为内标样品存储和管理。 Synthesis has begun with the goal of approximately 800 types of synthesis candidates for the SIRPL basic library, including interleukins and its receptors, interferons and its receptors, chemokines and its receptors, other cytokines and its receptors, hematopoietic factors and its receptors, cytotoxic factors and its receptors, cell growth factors and its receptors, ADAM metalloproteases, MT-MMP and MP金属蛋白酶及其抑制剂TIMP，包括孤儿受体，细胞外基质，癌基因和癌症抑制基因在内的各种GPCR。