チロシンホスファターゼSHP-2の標的基質蛋白質に関する研究

酪氨酸磷酸酶SHP-2靶底物蛋白的研究

基本信息

批准号：
10152240
负责人：
的崎尚
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152240/
关键词：
チロシンホスファターゼ SHP-2 SHPS-1 Ras MAPキナーゼ

项目摘要

研究代表者は、src-ホモロジー2領域(SH2ドメイン)を有しているPTPase、SHP-2を発見し以後一貫してこのPTPaseの細胞増殖機構における生理的役割につき研究を継続している。SHP-2は、様々な増殖因子刺激によるRas/MAPキナーゼの活性化に重要な役割を果たしている。SHP-2の生理機能を明らかにする上で、最近、私達は、SHP-2の結合基質蛋白質SHPS-1(SHP Substrate-1)の遺伝子クローニングに成功している。SHPS-1は、分子量120kDaの受容体型の糖化膜蛋白質で、4個のYXXL/V/Iチロシンリン酸化モチーフを細胞内部分に有している。増殖因子刺激や細胞接着刺激等によりSHP-2はSHPS-1と複合体を形成することにより活性化され、Ras/MAPキナーゼカスケードを活性化する可能性が想定される。しかしながら、SHPS-1/SHP-2複合体による、Ras/MAPキナーゼ活性化の詳細な機序は未だ不明である。そこで、本研究計画においては、以下の研究を行った。[1]SHPS-1の細胞内、外ドメインに対する結合分子の同定免疫グロブリンFc領域との融合蛋白とした可溶性SHPS-1細胞外ドメインを大量に精製し、これを探子として、SHPS-1リガンド候補蛋白質の解析を行った。肝臓、及び脳にSHPS-1リガンドの存在を示唆する結果を得ている。現在、Cos細胞を用いた発現クローニングを行っている。一方、SHPS-1の細胞内ドメインに結合する蛋白質を酵母LexA-Two-Hybrid Systcmを用いスクリーニングしたが、有望なクローンは得られなかった。[2]SHS-1遺伝破壊マウスの作製と解析SHPS-1遺伝子破壊マウスを作製した。[3]新規SHP-2結合基質蛋白質の同定SHP-2結合基質蛋白質は、PTPase活性を喪失した変異型SHP-2を強制発現させた際には、高度にチロシンリン酸化され且つSHP-2と安定な複合体を形成する分子量100K蛋白質を精製した。

主要研究人员发现了SHP-2，一种具有src同源2区域（SH2结构域）的PTPase，此后继续研究该PTPase在细胞增殖机制中的生理作用。 SHP-2 在各种生长因子刺激的 Ras/MAP 激酶激活中发挥重要作用。为了阐明SHP-2的生理功能，我们最近成功克隆了SHP-2结合底物蛋白SHPS-1（SHP Substrate-1）的基因。 SHPS-1是一种受体型糖化膜蛋白，分子量为120 kDa，胞内部分有四个YXXL/V/I酪氨酸磷酸化基序。推测SHP-2通过生长因子刺激、细胞粘附刺激等与SHPS-1形成复合物而被激活，并激活Ras/MAP激酶级联。然而，SHPS-1/SHP-2复合物激活Ras/MAP激酶的详细机制仍不清楚。因此，在本研究计划中，我们进行了以下研究。 [1] 与SHPS-1胞内和胞外结构域结合的分子的鉴定我们纯化了大量的SHPS-1可溶性胞外结构域作为与免疫球蛋白Fc区的融合蛋白，并以此作为探针来鉴定候选SHPS进行-1配体分析。我们获得的结果表明肝脏和大脑中存在 SHPS-1 配体。我们目前正在使用 Cos 细胞进行表达克隆。另一方面，我们使用酵母 LexA-Two-Hybrid Systcm 筛选了与 SHPS-1 胞内结构域结合的蛋白质，但没有获得有希望的克隆。 [2] SHS-1基因破坏小鼠的创建和分析我们产生了SHPS-1基因破坏小鼠。 [3] 新型 SHP-2 结合底物蛋白的鉴定 SHP-2 结合底物蛋白被高度酪氨酸磷酸化，并且当失去 PTPase 活性的突变型 SHP-2 被迫表达 A 时，会被 SHP-2 磷酸化。纯化了形成稳定复合物的分子量为100K的蛋白质。