軟骨由来増殖制御因子Chondromodulin-IIのクローニング

软骨源性生长调节剂软骨调节蛋白-II 的克隆

• 批准号: 08672363
• 负责人: 井上 博之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672363/
• 关键词: Chondromodulin; cloning; cartilage

ウシChondromodulin-II (ChM-II)のアミノ酸配列から、想定される塩基配列のプライマーを合成し、ウシ胎仔組織からのtotal RNAをテンプレートとして、RT-PCR法を用いてChM-II遺伝子の増幅を行った結果、約300bpのChM-II cDNA断片を得た。このChM-IIの部分遺伝子をプローブとして、ウシ胎児由来のcDNAライブラリーをスクリーニングしたが、ポジティブクローンを得るには至らなかった。そこで、完全長のChM-IIの遺伝子を得るために3′RACEおよび5′RACEを行った結果、ChM-IIの完全長cDNAのクローニングに成功した。塩基配列の解析からChM-IIcDNAは720bp、133アミノ酸残基からなる成熟型ChM-IIのN末端に18アミノ酸残基からなるシグナル配列が付加した前駆体蛋白質として生合成されることが推定された。cDNAの構造解析から、ChM-IIがrepeat構成を持たないことが判明し、MIM-1のウシ遺伝子産物に相当する蛋白質とは異なる新規な遺伝子産物であると考えられた。ChM-II遺伝子の発現組織を特定するために、先にクローン化したChM-IIcDNAをプローブとして、ウシ胎仔全組織poly (A)+RNA、ラット骨poly (A)+RNA、ラット骨芽細胞poly (A)+RNAを解析した結果、ウシ胎仔全組織で約1kbpヒト各種臓器のpoly (A)+RNAを用いたノーザンブロット解析を行った結果、膵臓と胸腺でChM-IImRNAの発現が確認された。

由牛软骨调节蛋白-II(ChM-II)的氨基酸序列合成具有假定的碱基序列的引物，并使用来自牛胎儿组织的总RNA作为模板，通过RT-PCR扩增ChM-II基因。 ，获得约300bp的ChM-II cDNA片段。使用该ChM-II部分基因作为探针筛选来自牛胎儿的cDNA文库，但没有获得阳性克隆。因此，我们通过3'RACE和5'RACE获得了ChM-II全长基因，并成功克隆了ChM-II全长cDNA。根据碱基序列分析，推测ChM-II cDNA是作为前体蛋白生物合成的，在成熟ChM-II的N末端添加了由18个氨基酸残基组成的信号序列，其长度为720 bp，由 133 个氨基酸残基组成。 cDNA结构分析表明ChM-II不具有重复结构，被认为是与MIM-1牛基因产物对应的蛋白质不同的新基因产物。为了鉴定ChM-II基因的表达组织，我们使用之前克隆的ChM-II cDNA作为探针，检测了整个胎牛组织中的poly(A)+RNA、大鼠骨骼中的poly(A)+RNA、大鼠成骨细胞中的poly(A)+RNA (A) +RNA 分析结果显示，在所有胎牛组织中均发现了人体各个器官中约1kbp 的多核苷酸。 (A) 使用 +RNA 的 Northern 印迹分析证实了胰腺和胸腺中 ChM-II mRNA 的表达。