真核生物型チロシンリン酸化・脱リン酸化を介する抗生物質生産制御メカニズムの解明

阐明真核酪氨酸磷酸化和去磷酸化控制抗生素生产的机制

基本信息

批准号：
18770175
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は,放線菌Streptomyces(S.)coelicolorA3(2)に存在するチロシンリン酸化タンパク質について,それらによる形態分化および抗生物質生産制御機構を明らかにすることを目的とし,以下の研究を実施した。1チロシンリン酸化タンパク質SCO5717の遺伝子破壊株の作製これまで,S.coelicolorのチロシンリン酸化タンパク質としてSCO5717を同定しており,SCO5717遺伝子をS.coelicolorに導入すると,増殖の遅延および色素性抗生物質の生産抑制が認められることを明らかにしている。SCO5717の機能をさらに明らかにするため,昨年度,SCO5717破壊株作製のためのベクターを構築した。本年度は構築したベクターを用い,相同組換えを利用したsingle crossover法により,SCO5717破壊株を作製した。作製したSCO5717破壊株について,その表現型を観察した結果,破壊株は野生株に比べて早期に気中菌糸を形成するとともに,色素性抗生物質を早期に産生した。2新規チロシンリン酸化タンパク質の同定昨年度,新規に開発したイムノアフィニティークロマトグラフィー法により,S.coelicolorからチロシンリン酸化タンパク質の分離・濃縮を行った。そこで本年度は,二次元ゲル電気泳動法および質量分析法を用いることにより,その同定を行った。その結果,新規チロシンリン酸化タンパク質として,superoxide dismutaseを同定することができた。以上,本研究の成果として,放線菌チロシンリン酸化タンパク質の新規機能を明らかにすることができた。今後,抗生物質の生産制御への応用が期待できる。

今年，进行了以下研究，目的是阐明存在于放线菌链霉菌（S.）Coelicolor A3（2）中酪氨酸磷酸化蛋白质的抗生素生产控制的形态分化和机制。到目前为止，至今，1-酪氨酸磷酸化的蛋白SCO5717的基因破坏已被鉴定为Coelicolor链球菌中的酪氨酸磷酸化蛋白，并且已经发现，当SCO5717基因被引入S. coelicolorib时，可以将其引入生产和抑制时，就可以延迟生产和抑制。为了进一步阐明SCO5717的功能，去年为SCO5717中断菌株的生产构建了一个向量。今年，使用今年构建的矢量使用同源重组的单个交叉方法，通过单个交叉方法制备了SCO5717破坏菌株。观察到了生成的SCO5717破坏菌株的表型，并且比野生菌株更早地形成了空中菌丝体，并早些时候产生了有色的抗生素。 2去年鉴定出新型酪氨酸磷酸化蛋白，使用新开发的免疫亲和力色谱法分离酪氨酸磷酸化蛋白并富集于Coelicolor。因此，今年，使用二维凝胶电泳和质谱法进行了识别。结果，超氧化物歧化酶可以被鉴定为一种新型的酪氨酸磷酸化蛋白。这项研究的结果，我们能够阐明放线菌酪氨酸磷酸化蛋白的新功能。预计将来它将应用于抗生素的生产控制。