新規アルギニン水酸化酵素の電子伝達系の同定と抗結核薬の大量生産システムの確立

新型精氨酸羟化酶电子传递链的鉴定及抗结核药物规模化生产体系的建立

基本信息

批准号：
21K06629
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は, 昨年度構築した発現系を利用して, フェレドキシン（FDX）およびFDX還元酵素（FDR）を精製し, D-サイクロセリン（D-CS）生合成に関与する新規アルギニン水酸化酵素DcsAの電子伝達系を明らかにするとともに, 抗癌剤ヒドロキシウレア（HU）の大腸菌を宿主とした生産系を構築することを目標として研究を実施した。まず, 昨年度構築した発現系を利用して, 各FDX（7種）およびFDR（2種）の発現性をSDS-PAGEにより調査した。その結果, 3種のFDX（Sla_0278, Sla_2106, Sla_5080）, および, 2種のFDR（Sla_0456, Sla_5644）が可溶性タンパク質として発現することが明らかになった。そこで, クロマトグラフィーの手法を用いることにより, これらタンパク質の精製を行った。その結果, 全てについて, ほぼ単一タンパク質として精製することに成功した。続いて, 精製したタンパク質について, 吸収スペクトル解析（260～600 nm）を実施した。その結果, 3種のFDXのうち, Sla_0278およびSla_5080については, 鉄/硫黄タンパク質に特徴的な吸収スペクトルが観測されたが, Sla_2106については観測されなかった。一方, 2種のFDRについては, フラビンタンパク質に特徴的な吸収スペクトルは観測されなかった。以上本年度においては, FDXおよびFDRをほぼ単一タンパク質として取得したが, FDRについては活性型と考えられるタンパク質を取得できなかった。そのため, 当初の研究計画では目標を達成することが困難になったので, 次年度は方針を変更して研究を継続する。

在这个财政年度，Ferleedoxin（FDX）和FDX还原酶（FDR）在去年建造的表达中进行了完善并使用，以及与D-Cyclicelline（D-CS）活的新精氨酸氢氧化物DCSA的电子组成。除了澄清传输系统外，我们还采用了使用抗癌药物羟基脲（HU）的大肠杆菌建设生产系统的研究。首先，使用去年构建的表达系统，通过SDS-PAGE研究了每种FDX（7种类型）和FDR（2）的表达。结果，发现三个FDX（SLA_0278，SLA_2106，SLA_5080）和两个FDR（SLA_0456，SLA_5644）表示为可溶性蛋白。因此，这些蛋白质是通过使用色谱方法来完善的。结果，所有这些都成功地将它们改进为几乎单一的蛋白质。随后，为精制蛋白实施了吸收光谱分析（260至600 nm）。结果，在三个FDX，SLA_0278和SLA_5080中，在铁/硫蛋白的吸收光谱中观察到，但未观察到SLA_2106。另一方面，对于两个FDR，在黄素树皮中未观察到吸收光谱。在这个财政年度，FDX和FDR几乎是单个蛋白质，但对于FDR，蛋白质被认为是活性类型。结果，很难在原始研究计划中实现目标，因此下一个财政年度将继续改变政策并继续研究。

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ゲノムマイニングに基づいたStreptomyces属放線菌NBRC14001株によるlucensomycin生産の顕在化

基于基因组挖掘揭示链霉菌放线菌 NBRC14001 菌株的亮霉素生产

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
西村祥;中村和音;森田大地;黒田照夫;熊谷孝則
通讯作者：
熊谷孝則

希少放線菌Actinoplanes awajinensis NBRC14279のゲノム解析

稀有放线菌 Actinoplanes awajinensis NBRC14279 的基因组分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤永遠;森田大地;黒田照夫;熊谷孝則
通讯作者：
熊谷孝則

緑膿菌のフルオロキノロン系抗菌薬耐性機構の偏好性及びMexXYの発現調節に関与する遺伝子変異の解析

铜绿假单胞菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制偏好及MexXY表达调控相关基因突变分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
和木坂樹;鳥丸顕正;森田大地;熊谷孝則;丸山史人;黒田照夫
通讯作者：
黒田照夫

ゲノム配列が導いたStreptomyces属放線菌NBRC14001株によるlucensomycin生産の発見

基于基因组序列发现链霉菌属放线菌菌株 NBRC14001 生产亮霉素

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
西村祥;中村和音;山本美也子;森田大地;黒田照夫;熊谷孝則
通讯作者：
熊谷孝則

Genetic diversity of Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) and Campylobacter in India and Japan

印度和日本产肠毒素大肠杆菌 (ETEC) 和弯曲杆菌的遗传多样性

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Morita;D.;Isobe;J.;Maenshi;E.;Kumagai;T.;Yamamoto;Y.;Kanda;M.;Kamikawa;Y.;Tahara;H.;Kitahara;K.;Miyoshi;S.;Choudhury;G.;Mukhopadhyay;A. K.;Dutta;S.;Maruyama;F.;Kuroda;T.
通讯作者：
T.