ブレオマイシン肺線維症のトリガー新規TGF-β遺伝子の働き

博来霉素触发肺纤维化的新型TGF-β基因的功能

基本信息

批准号：
14771283
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

ブレオマイシン(BLM)は、精巣癌などの治療に用いられる優れた抗癌剤であるが、副作用として重篤な肺線維症を引き起こすため、その使用には常に制限が伴う。これまで、ヒト肺正常線維芽細胞(WI-38)にBLMを投与した際に引き起こされる遺伝子発現の変化を、Differential Display(DD)法により調査した結果、transforming growth factor β(TGF-β)のsuperfamilyに属すると考えられる遺伝子の発現が昂進することを発見した。RT-PCRにより、BLM投与後、約3時間後から本遺伝子の発現が昂進することを明らかにしている。本研究では、本遺伝子とBLM肺線維症の関係を明らかにすることを目的とした。DD法により得られた遺伝子は、その3'末端の一部の配列であったため、まず、全長型遺伝子を5'-RACE法によりクローニングすることを試みた。3'末端配列の情報に基づき、遺伝子特異的プライマー(GSP)を数種類作成後、Smart RACE cDNA Amplification Kit (Clontech)を用いて5'-RACEを行った結果、全長型遺伝子と考えられる断片を得ることができた。シークエンシングの結果、得られた遺伝子の3'末端配列は、TGF-β superfamily遺伝子と相同性を示したが、その5'側の配列はDatabase上の遺伝子と明確な相同性を示さなかった。現在、得られた全長型遺伝子を発現ベクターpcDNA 3.1(Invitrogen)に導入し、本遺伝子の過剰発現が線維芽細胞に及ぼす影響を調査している。また、得られた全長型遺伝子が目的の遺伝子でない場合も考慮し、5'-RACEによるクローニングも並行して行っている。

百霉素（BLM）是一种出色的抗癌药物，用于治疗，例如睾丸癌，但它总是有限的，因为它会导致严重的肺纤维化作为副作用。到目前为止，由于研究了通过不同显示（DD）ACT对人肺成纤维细胞（WI-38）施用BLM引起的基因变化的结果，从而转化了Growther因子β（TGF-β）的转化GROWTHER因子（TGF）（TGF）（TGF-β） -β）发现属于超家族的基因的表达正在进行中。 RT-PCR揭示了主geen的表达将在BLM给药后大约3小时进行。在这项研究中，目的是阐明基因与BLM肺纤维化之间的关系。由于通过DD方法获得的基因是3端的一部分，因此我们首先试图通过5'-Race方法来克隆总体基因。 3。基于终端排列信息，在创建了几种基因特异性引物（GSP）之后，使用智能种族cDNA扩增试剂盒（Clontech）执行5'-Race，从而获得被认为是全长基因的片段能够做到。序列的结果是，获得的基因3'末端序列表明它们与TGF-β超家族基因是同源的，但是5'侧的序列并没有与数据库上的基因具有明显的分类。目前，获得的总基因已引入载体pcDNA 3.1（Invitrogen），并正在研究基因过度表达对成纤维细胞的影响。此外，考虑到所获得的总体基因不是靶基因的事实，5'race克隆也是并行的。