ディファレンシャルディスプレー法を用いたブレオマイシン肺線維症の分子機構の解明

差异显示法阐明博来霉素肺纤维化的分子机制

基本信息

批准号：
10771291
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771291/
关键词：
ブレオマイシン Differential Display 半定量RT-PCR 細胞周期遺伝子発現

项目摘要

ブレオマイシン(Bm)は、扁平上皮癌・精巣癌などに用いられる重要な抗癌剤であるが、長期投与により肺線維症と呼ばれる重篤な副作用を引き起こし易い。本研究では、肺正常繊維芽細胞株WI-38を用い、Bm投与時に引き起こされる遺伝子発現の変化をDifferential Display(DD)法により解析し、肺線維症の分子メカニズムの解明を目的とした。【方法】Bm投与・非投与のWI-38細胞からtotal RNAを抽出し、DD法を用いてBmにより誘導される遺伝子を検出した。さらに、半定量RT-PCRにより、誘導される遺伝子の発現状況を経時的に調べた。【結果】DD法の結果、Bm投与により誘導される遺伝子が多数見い出された(数十種)。それら遺伝子について、DNA塩基配列を決定し、ホモロジー解析を行ったところ、p21,proliferating cell nuclear antigen(PCNA)など、細胞周期に関連する遺伝子であることが判明した。これらの遺伝子およびその関連遺伝子(p53,ki-67 antigenなど)について、半定量のRT-RCRを用いてBm投与後の経時的な発現を調べたところ、p21およびPCNAはその発現が上昇し、ki-67 antigenは減少していた。また、Bm投与したWI-38細胞をローダミン・ファロイジン染色したところ、ストレスファイバーの消失が認められた。これらの結果から、細胞はBmによるDNA損傷を修復するための応答を行い、細胞周期の停止を引き起こすものと思われた。今後は、さらにDD法を行い、Bm肺線維症に関わる遺伝子を取得し、その分子機構を解明したいと考えている。

百肌素（BM）是一种重要的抗癌药物，用于鳞状造血癌和睾丸癌，但长期给药可以很容易地引起严重的副作用，称为肺纤维化。在这项研究中，使用肺部正常纤维和BUN WI-38分析了BM在BM时引起的基因表达的变化，并通过不同的表现（DD）ACT分析了BUN WI-38，以及阐明肺纤维化的分子机制的目的。 [方法]从BM给药和非管理WI-38细胞中提取总RNA，并使用DD方法检测BM诱导的基因。此外，随着时间的流逝，检查了由半射线RT-PCR诱导的基因的表达。 [结果]由于DD方法，发现了BM给药引起的许多基因（数十个基因）。当确定对这些基因的DNA碱基序列分析时，发现它是细胞周期相关的基因，例如P21，增殖的细胞核抗原（PCNA）。当这些基因及其相关的基因（p53，ki-67等）在BM施用后的加班时，P21和PCNA的表达增加了。另外，当给予WI-38细胞用WI-38细胞染色时，观察到应力纤维的损失。这些结果表明，细胞对BM的修复DNA损伤做出了反应，从而导致细胞周期悬浮液。将来，我们希望实施进一步的DD方法，获取与BM肺纤维化有关的基因，并阐明分子机制。