ブレオマイシンセンサー蛋白質を用いた遺伝子治療-癌化学療法へのニューアプローチ-

使用博莱霉素传感器蛋白的基因治疗 - 癌症化疗的新方法 -

基本信息

批准号：
08772096
负责人：
熊谷孝則
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ブレオマイシン(Bm)は、放線菌Streptomyces verticillusにより生産される抗生物質であり、扁平上皮癌などの治療に用いられている。しかしながら、長期投与により、副作用として肺線維症を起こしやすく、その投与は慎重にならざるを得ない。私たちの研究グループは、Bm生産菌より、Bmを特異的に認識し、結合する蛋白質(BLMA)を発見し、その遺伝子(blmA)のクローニングに成功した。BLMAがBmに結合すると、BmのDNA切断作用は失われる。この機能に着目し、本遺伝子を肺組織中で発現させることができれば、Bm投与による肺線維症を防止できるものと考えた。本研究では、培養細胞におけるblmAの発現を試み、その機能を解析した。強力なEF-1αプロモーターの下流にblmAを連結し、構築したプラスミドをリポフェクションにより、NIH3T3細胞に導入した。その結果、Bm耐性を示すクローンを得ることに成功した。本クローンは、BLMAを確かに生産しており、その生産は1か月以上継続した。本クローンの薬剤耐性を調べたところ、Bm系抗生剤にのみ耐性を示し、その特異性の高さが示された。抗BLMA抗体を用いた免疫染色により、BLMAは核に局在することが明らかになった。このことは、核において、BmからDNAを保護するのに役立っているものと考えられた。本クローンは、Bm存在下でも野性型細胞と同等の増殖度を示し、形態的にも変化が認められなかった。以上の結果より、blmAは培養細胞において、Bm耐性因子として機能できることが明らかになった。従って、in vivoへの応用に一歩近づいたと思われる。なお、本研究で得られた成果について、現在、論文を作成中である。

百肌霉素（BM）是通过接线细菌生产的一种抗生素，用于治疗，例如鳞状细胞癌。但是，长期给药很容易引起肺纤维化作为副作用，其给药必须谨慎。与BM生产商相比，我们的研究小组专门识别BM，发现了结合蛋白（BLMA），并成功地克隆了其基因（BLMA）。当BLMA与BM结合时，BM DNA切割效果会丢失。为了关注此功能，我们认为，如果可以在肺组织中表达该基因，则BM给药可以预防肺纤维化。在这项研究中，尝试了培养细胞中BLMA的表达，并分析了该功能。 BLMA连接到强大的EF-1α启动子的下游，并将内置质粒引入NIH3T3细胞。结果，我们成功地获得了表现出BM电阻的克隆。该克隆当然产生了BLMA，其产量持续了一个多月。检查该克隆的耐药性，仅表示对BM抗生素的耐药性，并显示了其特异性的高度。使用抗-BLMA抗体的免疫材料表明，BLMA位于核中。这被认为可用于保护DNA免受核武器的BM的影响。该克隆在BM存在下显示出与野生型细胞相同的增殖，并且形式不变。从以上结果来看，很明显，BLMA可以充当培养细胞中的BM抗性因子。因此，似乎已经更近了一步，即接近体内的应用程序。此外，目前正在为本研究获得的结果做准备。