線維化に伴う血清糖のタンパク質の癌鎖構造変化の機構と機能

纤维化相关血清糖蛋白癌链结构变化的机制和功能

基本信息

批准号：
05770106
负责人：
福島慶子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイルス性肝障害は肝炎から肝硬変、肝癌へと進展することが多い。著者のグループでは肝炎から硬変化(線維化)に伴い血清中にフコシル化されたコリンエステラーゼが顕著に上昇し、これが肝硬変、肝癌への進展の良い示標となる可能性を示した(1993)。この糖鎖変化の実体を明らかにするため、同様の変化が認められるトランスフェリン(Tf)の糖鎖の構造を解析した。まず、健常人、肝硬変、肝癌患者血清より抗Tf抗体カラムを用いてTfを精製し、透析後クロマトフォーカシング(pH6.2-5.0)によりシアル酸の結合数の違いによりS_3、S_4、S_5イソフォームを分離した。健常人TfはS_4のみであった。これらのイソフォームそれぞれ100mugからヒドラジン分解によりAsn結合型糖鎖を遊離させ、N-アセチル化後、NaB〔^3〕_4により還元末端をトリチウム標識した。これらの糖鎖をMonoQカラムクロマトグラフィー、レクチルカラムクロマトグラフィー、Bio-Gel P4ゲルろ過カラムクロマトグラフィーなどにより分析した結果、健常人、肝硬変、肝癌患者ともTfS_4はジシアリル2本鎖であった。一方、肝硬変、肝癌患者のS_5の糖鎖はC-2,6分岐した3本鎖と2本鎖がほぼ等モルであり、どちらも全れの側鎖にシアル酸が結合していた。肝硬変患者では健常人TFにはほとんど認められないFucalpha1→3結合側鎖が増加し、シアリルルイスX構造が出現していることが明らかになった。ところが肝癌患者のS_5ではルイスX構造が減少していた。細胞の線維化に伴うシアリルルイスX糖鎖が炎症時に白血球と血管内皮細胞の接着に関与している細胞接着因子ELAM-1が認識するエピトープと同じであるかどうか興味があり、シアリルalpha2→?Galbeta1→4(Fucalpha1→3)GicNAc含有糖鎖が、線維化においても何らかの細胞間相互作用を調節している可能性が考えられる。なお、ブレオマイシン投与による実験的肺線維症ラットの血清Tfにおいても類似の変化が認められ、現在詳細な解析を行なっているところである。

病毒肝损伤通常从肝炎发展为肝硬化和肝癌。在作者的组中，由于僵硬（纤维化）引起的乙型肝炎，胆碱酯酶在血清中的葡萄糖基化显着增加，这表明这可能是急性发展为肝硬化和肝癌的良好指标（1993）。为了阐明糖链的实际变化，我们分析了转铁蛋白（TF）的糖链的结构，该结构表现出相似的变化。首先，使用抗TF抗体柱从健康个体，肝硬化和肝癌患者的血清中纯化TF，在透析染色体量焦孔（pH 6.2-5.0）之后，S_3，S_4和S_5同工型由于唾液酸结合的数量而分离。唯一健康的人TF是S_4。这些同工型中的每一个都通过氢氮分解为ASN连接的糖链释放，并且在进行N-乙酰化后，用NAB [^3] _4标记了还原的末端。通过Monoq柱色谱法，脑色谱，Bio-Gel P4凝胶过滤柱色谱法分析这些聚糖，并发现TFS_4在健康个体，Cirrhosis和肝癌患者中都持续了双链。另一方面，肝硬化和肝癌患者中S_5的聚糖在C-2中大约是等摩尔的，三支三链和双链的C-2和6支链球和6支分支，并且都与所有侧链结合了唾液酸。据显示，在健康的TF中很少见到Fucalpha1→3连接的侧链，肝硬化患者增加了，并且出现了Siallyl Lewis X结构。但是，在肝癌患者中，路易斯X结构降低了。有趣的是，看看与细胞纤维化相关的siallyl Lewis X糖囊是否与细胞粘附因子ELAM-1相同的表位相同，而细胞粘附因子ELAM-1与炎症期间白细胞和血管内皮细胞的粘附有关还调节纤维化过程中一些细胞 - 细胞相互作用。在大鼠的血清TF中也观察到类似的变化，该大鼠具有由施用博来霉素引起的实验性肺纤维化，目前正在进行详细的分析。