絨毛癌細胞が異常産生するシアリルα2→6残基結合糖鎖の生合成機構

绒毛膜癌细胞异常产生唾液酸α2→6残基连接糖链的生物合成机制

基本信息

批准号：
08780567
负责人：
福島慶子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト絨毛癌細胞株JEG-3が産生する胎盤型アルカリホスファターゼ(ALP)並びに絨毛性性腺刺激ホルモン(hCG)についてキカラスウリレクチン(TJA-I)を用いたレクチンカラムクロマトグラフィーを行った。TJA-IはSiaα2→6Galβ1→4GlcNAc残基を認識し、糖蛋白質分離に関する有用性は既に報告している。ALPは酵素活性測定、hCGはELISAによりその結合性を調べたところ、約30%が結合画分に回収された。一方、精製された正常ヒト尿中hCG及び胎盤性ALPについて同様にTJA-Iカラムクロマトグラフィーを行ったところ、結合する分子種は認められなかった。したがってJEG-3細胞におけるシアリルα2→6残基の異常産生が明確にされた。そこで、正常ヒト胎盤組織とJEG-3細胞からミクロソーム画分を調製し、N-アセチルラクトサミンを基質としてα2,3-シアリルトランスフェラーゼとα2,6-シアリルトランスフェラーゼの活性測定を行った。その結果、蛋白量当たりのα2,6-シアリルトランスフェラーゼ活性が癌化に伴って約3倍に増加していることが判明した。したがって、シアリルα2→6残基出現の背景にα2,6-シアリルトランスフェラーゼ活性上昇が存在することが明らかになった。現在、両シアリルトランスフェラーゼのmRNA量をNorthern blot法を用いて調べるために、RT-PCR法によりプローブ作製が終了したところである。α2,6-シアリルトランスフェラーゼの転写調節機構を含めて癌化に伴うα2,6-シアリルトランスフェラーゼの発現機構を明らかにしていく予定である。

人类绒毛膜癌细胞系JEG-3产生的胎盘碱性磷酸酶（ALP）和绒毛膜促性腺激素（HCG）是使用Cycarasu Uric Lectin（TJA-I）的凝集素色谱柱色谱法。 TJA-I识别SIAα2→6GALβ1→4GLCNAC残基，并且已经报道了其在糖蛋白分离中的有用性。当测量ALP的酶活性并通过ELISA测试HCG的结合特性时，在结合分数中回收了约30％。另一方面，当纯化的正常人尿液HCG和胎盘ALP同样通过TJA-I色谱柱色谱法进行，没有发现结合分子物种。因此，阐明了JEG-3细胞中siAllylα2→6残基的异常产生。因此，从正常的人胎盘组织和JEG-3细胞中制备微粒体级分，并使用N-乙酰乳乙胺作为底物测量α2,3-溶解酶的活性和α2,6-溶聚转移酶。结果，发现每个蛋白质量的α2,6-溶解酶活性因癌症而增加了三倍。因此，已经表明，在siAllylα2→6残基的外观背景下存在α2,6-溶解酶活性的增加。目前，RT-PCR已经完成了探测器准备，以使用Northern印迹方法研究两种乙烯基转移酶的mRNA量。我们计划阐明与癌症相关的α2,6-溶解酶表达的机理，包括α2,6-溶解酶的转录调节机制。