染色体DNA標的部位のin vivo配列改変技術

染色体DNA靶位点体内序列修饰技术

• 批准号: 21659015
• 负责人: 紙谷 浩之
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659015/
• 关键词: 配列改変; 染色体DNA; 遺伝子修復

Tailed duplexesによる一塩基フレームシフト変異の修復:研究代表者の以前の研究により、一塩基置換変異の修復(TGA配列のTCA配列への修復)においては、一本鎖DNAの3'-末端付近にオリゴヌクレオチドをアニールさせて作製した5'-tailed duplex、一本鎖DNAの5'-末端付近にオリゴヌクレオチドをアニールさせて作製した3'-tailed duplex、及び、一本鎖DNAの3種を比較した場合、5'-tailed duplex>3'-tailed duplex>一本鎖DNAの順に効率が高いことが明らかにされている。そこで、tailed duplexesの一塩基挿入変異や一塩基欠失変異の修復効率を培養細胞を用いて調べた。標的遺伝子は、一塩基フレームシフト変異を有するHyg-EGFP(ハイグロマイシン耐性遺伝子とEGFP遺伝子の融合遺伝子)遺伝子を用いた(TCGA、TA配列のTCA配列への修復)。その結果、tailed duplexesは挿入変異・欠失変異を修復できること、及び、tailed duplexesの方が一本鎖DNAよりも両変異の修復効率が高い傾向にあることを明らかとした。しかし、一塩基フレームシフト変異の修復効率は一塩基置換変異の修復効率の数十分の一であった。また、5'-tailed duplexと3'-tailed duplexの序列については、明らかではなかった。

使用带尾双链体修复单核苷酸移码突变：主要研究者之前的研究表明，在单核苷酸替换突变的修复（将TGA序列修复为TCA序列）中，通过退火寡核苷酸创建5'-尾双链体，3'-通过对单链 DNA 5' 端附近的寡核苷酸进行退火而产生的带尾双链体当比较三种类型的双链体和单链DNA时，表明效率按照5'尾双链体>3'尾双链体>单链DNA的顺序较高。因此，我们使用培养细胞研究了带尾双链体中单核苷酸插入突变和单核苷酸缺失突变的修复效率。作为靶基因，使用具有单核苷酸移码突变的Hyg-EGFP(潮霉素抗性基因和EGFP基因的融合基因)基因(TCGA，TA序列向TCA序列的修复)。结果表明，带尾双链体可以修复插入和缺失突变，并且带尾双链体往往比单链 DNA 更有效地修复这两种突变。然而，单核苷酸移码突变的修复效率是单核苷酸取代突变的十分之几。此外，5'尾双链体和3'尾双链体的顺序不清楚。

项目成果

マウス肝臓における遺伝子修復(部位特異的配列変換)

小鼠肝脏中的基因修复（位点特异性序列转换）

• 发表时间: 2010
• 作者: 紙谷浩之; 内山雅普; J.Piao; 中津可道; 續輝久; 原島秀吉
• 通讯作者: 原島秀吉

Gene correction in mouse liver

小鼠肝脏的基因校正

• 发表时间: 2010
• 作者: H.Kamiya; M.Uchiyama; J.Piao; Y.Nakatsu; T.Tsuzuki; H.Harashima
• 通讯作者: H.Harashima

遺伝子修復核酸 5'-tailed duplexの開発

基因修复核酸5尾双链体的开发

• 发表时间: 2010
• 作者: 紙谷浩之

培養細胞を用いた染色体DNA配列変換アッセイ系の確立

利用培养细胞建立染色体DNA序列转换测定系统

• 发表时间: 2009
• 作者: 守田由子;鈴木哲矢;原島秀吉;紙谷浩之
• 通讯作者: 紙谷浩之

Tailed duplexを用いたフレームシフト変異の修復

使用有尾双链体修复移码突变

• 发表时间: 2010
• 作者: 守田由子; 原島秀吉; 紙谷浩之
• 通讯作者: 紙谷浩之