分裂酵母の相同組換えにおけるFbh1ヘリケースの機能解析

裂殖酵母同源重组中Fbh1解旋酶的功能分析

基本信息

批准号：
06F06416
负责人：
岩崎博史
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、組換え(修復)における分裂酵母Fbh1の機能の解明を目的とした。Fbh1は出芽酵母には存在せず、ヒトなど高等生物に保存されたFボックスモチーフをもつユニークなヘリケースで、これまでの我々の遺伝学的解析から、Rad51(分裂酵母ではRhp51と呼ばれることもある)による鎖交換反応の前後2つのステップで機能することが示唆されている。さらに、Fボックスを持つことからユビキチン修飾系のE3としても機能し、Rhp51による鎖交換反応に関与するタンパク質をユビキチン化することが予想されている。Rqh1ヘリカーゼやSrs2ヘリカーゼとの二重変異株が致死になることから、これらのヘリカーゼとの機能的オーバーラッピングが予想されている。Fbh1がどのように組換え修復に関与するのかを明らかにする目的で、英国のHumphreyのグループが開発した、DNA二重鎖切断(DSB)を任意に誘導してその修復スペクトラムを解析するDSBアッセイ法を用いて、fbh1欠損株の修復スペクトラムを解析した。相同組換えの反応産物を大別すると、交差を伴う組換え体(単に交差型とも呼ばれる)と交差を伴わない組換え体(遺伝子変換型とも呼ばれる)にわかれる。上述のDSBアッセイの結果、Fbh1欠損株は野生型株に比べて有意に交差型組換えの割合が上昇していた。このことは、野生型の分裂酵母における組換え修復では、交差型組換え体の生成が抑制されていることが知られているが、この交差型組換え体生成の抑制にFbh1ヘリカーゼが関与する事を強く示唆した。

在这项研究中，我们旨在阐明民间酵母FBH1在重组中的功能（修复）。 FBH1是一种独特的解旋酶，其f -box基序存储在人类等高度生物体中，从我们到目前为止的遗传分析中，Rad51（有时在分裂酵母中称为RHP51。交换反应。此外，由于它具有F框，因此它也将充当泛素修饰系统的E3，并且预计将使用RHP51涉及的链交换反应的蛋白质。预计将与这些解旋酶进行功能性超过，因为具有RQH1解旋酶和SRS2解旋酶的双变量库存是致命的。 DSB分析是由英国汉弗莱组开发的，目的是阐明FBH1如何参与重组恢复，诱导DNA双链切割（DSB）任意诱导DNA双链切割（DSB），并使用法律分析了FBH1缺陷频谱。分析了库存。所在的反应性产品被广泛分为重组体（简单地称为相交类型）和重组体（也称为遗传转化类型）。由于上述DSB测定法，与野生型菌株相比，FBH1缺乏份额显着增加了交叉点的百分比。众所周知，这在野生型酵母中的重组修复中的相互作用中被抑制，但是FBH1解旋酶参与抑制这种交叉型重组产生。