RecG蛋白質による相同組換え中間体ホリデ-構造の分岐点移動反応の分子機構

RecG蛋白同源重组中间体结构分支点转移反应的分子机制

基本信息

批准号：
07780601
负责人：
岩崎博史
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のRecGタンパク質は,遺伝的相同組換えの反応中間体であるホリデ-構造のDNA分岐点移動反応を促進するDNAヘリケースである。ホリデ-構造のプロセッシングには,別にRuvタンパク質群(RuvA-RuvB複合体;ホリデ-構造のヘリケース,RuvC;ホリデ-構造特異的エンドヌクレアーゼ)が知られており,RecGとRuvタンパク質との機能的相違点は興味が持たれるが,本研究では,RecGタンパク質の新たな機能として以下のことを明らかにした。1)RecGタンパク質は,2次構造をとるRNAとDNAとのハイブリッド(R-ループ)のRNA部分を巻戻す活性(R-ループ特異的RNAヘリケース活性)がある。2)RecGの過剰発現によって,ColE1プラスミドのコピー数が減少する。3)in vitroのColE1のDNA複製開始が,RecGを添加することによって阻害される。ColE1の複製開始には,R-ループがプライマーとして関与することが知られており,RecGによるこのDNA合成阻害は,1)の活性によるものである。以上の結果は,RecGがColE1プラスミドのDNA複製開始にも関与していることを示す。一方,RnaseH欠損株でみられる大腸菌の染色体複製(安定DNA複製)にRecGが関与することを示唆する他のグループの遺伝学的解析があるが,本研究成果は,そのアナロジー,もしくは,モデル系と考えられ,今後,RecGの染色体複製における役割をin vitroで解析する端緒とすることができた。

大肠杆菌的RecG蛋白是一种DNA解旋酶，可促进holide结构的DNA分支转移反应，是遗传同源重组的反应中间体。已知另一个 Ruv 蛋白组（RuvA-RuvB 复合物；Holide 结构的解旋酶，RuvC；一种 Holide 结构特异性核酸内切酶）参与 Holide 结构的加工，并且 RecG 和 Ruv 蛋白之间存在功能差异。在本研究中，我们揭示了RecG蛋白的以下新功能。 1) RecG 蛋白具有解旋具有二级结构的 RNA 和 DNA 杂合体（R 环）的 RNA 部分的活性（R 环特异性 RNA 解旋酶活性）。 2) RecG 的过表达减少了 ColE1 质粒的拷贝数。 3) RecG的添加抑制了ColE1 DNA体外复制的启动。众所周知，R 环作为引物参与 ColE1 复制起始，并且 RecG 对 DNA 合成的抑制是由于 1) 的活性。这些结果表明RecG还参与ColE1质粒的DNA复制的起始。另一方面，其他小组的遗传分析表明，在 RnaseH 缺陷菌株中观察到 RecG 参与大肠杆菌染色体复制（稳定 DNA 复制）；这可能作为未来体外分析的起点。 RecG 在染色体复制中的作用。