大腸菌RuvCエンドヌクレアーゼの構造と機能

大肠杆菌 RuvC 核酸内切酶的结构和功能

• 批准号: 07268211
• 负责人: 岩崎 博史
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07268211/
• 关键词: ホリデ-構造; RuvCエンドヌクアーゼ; X線結晶構造解析; 相同組換え; 蛋白質立体構造; DNA認識; 大腸菌

大腸菌RuvCタンパク質は相同組換え反応の中間体であるホリデ-構造を特異的に認識し切断するエンドヌクレアーゼである。ホリデ-構造は,相同な2分子の2重鎖DNAが相互に単鎖DNAを交換しリンクしたユニークな高次構造である。それをRuvCがどのように認識して切断するかという点に注目して,タンパク質の構造と機能との相関関係を明らかにすることが,本研究の目的である。我々は,前年度までに,X線結晶構造解析によりRuvCの立体構造を明らかにしており,また,構造との相関を図るために,多数のミュータントを単離していた。本年度においては,今までの解析や準備をもとに,RuvCミュータントタンパク質をそれぞれ精製し,各々の生化学的な解析を行い,in vivoのキャラクラリゼーションと併せて,RuvC蛋白質の機能(活性中心,DNA結合,2量体形成など)に関与するアミノ酸残基をほとんどすべて同定することができた。

大肠杆菌 RuvC 蛋白是一种核酸内切酶，可特异性识别并切割 Holide 结构，该结构是同源重组反应的中间体。 Holide结构是一种独特的高阶结构，其中两个同源双链DNA分子通过彼此交换单链DNA而连接。本研究的目的是阐明蛋白质结构和功能之间的相关性，重点关注 RuvC 如何识别和切割它。直到前一年，我们已经通过X射线晶体学阐明了RuvC的三维结构，并且还分离出了大量的突变体以便与该结构进行关联。今年，根据迄今为止所做的分析和准备，我们将纯化每种RuvC突变蛋白，对每种蛋白进行生化分析，并进行体内表征以及RuvC蛋白（活性中心）的功能。识别几乎所有参与 DNA 结合、二聚体形成等的氨基酸残基）。

项目成果

H.Shinagawa, et al.: "Molecular mechanisms of Holliday junction processing in Eschevichia coli" Adv. Biophys.31. 49-65 (1995)

H.Shinakawa 等人：“大肠杆菌霍利迪连接体加工的分子机制”Adv。

A.Saito, et al.: "ldentification of four acidic amino acids that constitute the catalytic center of the RuvC Holliday junction resolvase" Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92. 7470-7474 (1995)

A.Saito 等人：“构成 RuvC Holliday junction 分解酶催化中心的四种酸性氨基酸的鉴定”Proc.