DNA二重鎖切断の認識・修復の分子機構に基づく放射線感受性予測・制御の新戦略体系

基于DNA双链断裂识别与修复分子机制的放射敏感性预测与控制新策略体系

基本信息

批准号：
17689036
负责人：
松本義久
金额：
$ 18.72万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology (2006-2007)The University of Tokyo (2005)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1.DNA-PKの真の基質とリン酸化の意義を明らかにするため、これまで検討を続けてきたXRCC4と2006年に新規に発見された分子XLF/Cernunnosについて重点的な検討を行った。XRCC4については、昨年度までの研究で明らかになった部位3カ所の他に、新たに1カ所が同定された。この部位については、文献情報等から他の修復酵素との相互作用に関わる可能性が考えられる。XLFについては2カ所のリン酸化部位が同定された。これら3カ所についてリン酸化状態特異的抗体を作製した。2.これまでに、XRCC4が放射線照射後にクロマチンに結合している状態を捉まえる方法を確立した。本年度は、siRNA、阻害剤などを用いてXRCC4の損傷クロマチン結合機構を解析した結果、DNA-PK及び類縁酵素のATMは結合に必要ではないことが分かった。このXRCCクロマチン結合カイネティクスは極めて早く、2Gy照射の場合、直後にピークとなり、30分後にはほとんどもとの状態に戻る。更に、定量的解析の結果、クロマチン結合XRCC4はDNA二重鎖あたり1個から数個と見積もられた。従って、この方法はin vivoでのDNA二重鎖切断修復反応を反映する迅速で微量の反応を捉えるのに優れていると考えられる。また、この方法を利用して、クロマチンごとXRCC4を精製した。この成分を明らかにすることにより、NHEJによるDNA二重鎖切断修復の全体像理解の進展が期待される。3.これまでの研究で、ヒト末梢血リンパ球のDNA-PK活性には大きな個人差があり、がん患者では健常人に比べて低い傾向が観察されていた。その機構について、DNA-PKcs、Ku86、Ku70に共通する転写調節機構の存在が示唆されていた。本年度、バイオインフォマティクスを加えた検討により、細胞周期節に関わるE2F がこの制御に関わっていることが示唆されていた。

1。为了阐明DNA-PK磷酸化的真实底物和意义，我们对XRCC4进行了关注，直到现在我们一直在研究，而XLF/Cernunnos是一个新发现的分子，该分子是在2006年发现的。除了在最后一年的研究中还揭示了三个地点，还透露了一个新地点。该站点可能与基于文献信息等与其他维修酶的互动有关。针对XLF鉴定了两个磷酸化位点。在这三个位点制备了磷酸化特异性抗体。 2。迄今为止，我们已经建立了一种捕获XRCC4在辐射后赋予染色质的状态的方法。今年，我们使用siRNA，抑制剂分析了XRCC4损伤染色质结合的机理，并发现DNA-PK和相关酶ATM不需要结合。这种XRCC染色质结合动力学非常快，在2GY辐射的情况下，它立即达到峰值，此后它在30分钟后恢复到原始状态。此外，定量分析估计，每个DNA双链体的染色质结合的XRCC4为1至几个染色质结合的XRCC4。因此，该方法被认为是捕获快速的痕量反应，反映了体内DNA双链断修复反应的快速反应。此外，使用此方法将XRCC4用染色质纯化。通过阐明此组件，可以预计NHEJ将了解DNA双链休息修复的整体情况。 3。先前的研究已经观察到人类外周血淋巴细胞的DNA-PK活性较大，癌症患者的趋势低于健康个体。已建议该机制具有DNA-PKC，KU86和KU70的转录调节机制。今年，生物信息学的结合研究表明，与细胞周期有关的E2F参与了该调节。