DNA依存性プロテインキナーゼからのアプローチによるがん温熱療法の基礎研究

使用DNA依赖性蛋白激酶方法进行癌症热疗的基础研究

基本信息

批准号：
11770496
负责人：
松本義久
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

温熱の放射線増感作用とDNA依存性プロテインキナーゼ(DNA-PK)の温熱不安定性の関係を探るアプローチの一つとして、DNA-PKcs(触媒サブユニット)またはKuサブユニットを欠損するほ乳類培養細胞を用いた検討を行った。欠損細胞においても温熱処理による放射線感受性の増強は認められたが、放射線単独に対する感受性が非常に高いため対照細胞との比較が難しく、結論を下すにはより詳細な検討を行う必要があると考えられた。また、温熱単独処理に対する感受性の検討も同時に行った。近年、DNA-PKのサブユニットを欠損する細胞が温熱高感受性を示すという結果をいくつかの他グループが発表しているが、本研究の結果は必ずしもこれらと一致しなかった。これまで、DNA-PKの細胞内の基質が明らかになっておらず、in situでのDNA-PK活性を評価する方法がなかった。私は、DNA ligase IVと複合体を形成し、DNA二重鎖切断修復に関与すると考えられているXRCC4タンパク質に着目し、SDS-PAGE-Western法で解析した。その結果、X線照射によって誘導されるXRCC4のリン酸化にDNA-PKcsが必要(一方、ATMは不要)であることが分かり、XRCC4がDNA-PKの細胞内での基質(の1つ)になっている可能性が示された(FEBS Lett.,2000)。この結果から、XRCC4のリン酸化を指標として、DNA-PK活性に対する温熱処理の影響をin situで調べることが可能になると期待される。

探索热放射增敏效应与 DNA 依赖性蛋白激酶 (DNA-PK) 热不稳定性之间关系的一种方法是使用缺乏 DNA-PKcs（催化亚基）或 Ku 亚基的培养哺乳动物细胞。在缺陷细胞中也观察到热处理导致放射敏感性增强，但由于单独对放射线的敏感性极高，因此很难与对照细胞进行比较，我们认为需要进行更详细的研究才能得出结论。完成了。同时，我们还研究了对单独热处理的敏感性。近年来，其他几个研究小组发表的结果表明，缺乏DNA-PK亚基的细胞表现出高热敏感性，但本研究的结果并不一定与这些一致。迄今为止，DNA-PK的胞内底物尚未阐明，也没有原位评估DNA-PK活性的方法。我重点研究了 XRCC4 蛋白，它与 DNA 连接酶 IV 形成复合物，被认为参与 DNA 双链断裂修复，并使用 SDS-PAGE-Western 方法对其进行了分析。结果发现，X射线照射诱导的XRCC4磷酸化需要DNA-PKcs（另一方面，不需要ATM），并且XRCC4是DNA-的细胞内底物（之一）。 PK。（FEBS 通讯，2000 年）。根据该结果，预计可以使用XRCC4磷酸化作为指标来研究热处理对原位DNA-PK活性的影响。