生活習慣病を引き起こす高コレステロール血症・酸化LDLと歯周病の関連について

关于导致生活习惯病的高胆固醇血症和氧化LDL与牙周病的关系

基本信息

批准号：
17791559
负责人：
山本松男
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791559/
关键词：
生活習慣病酸化LDL 歯周病

项目摘要

本研究計画は、歯周組織および歯周病病態に対する高コレステロール・酸化LDLの関わりの検討を目的とするものである。in vitro細胞培養解析系において検討する変性脂質の調整方法について、用事調整の必要があり、金属イオンを触媒とする酸化変性の手法の安定化を図り、安定した手法を確立した。AP-1-またはNF-kB-Luciferaseのレポーター遺伝子を導入した口腔粘膜由来上皮細胞株を作製し、炎症反応の定量的な測定系を確立した。また、培養細胞上清中の炎症性サイトカイン6種のタンパク量を直接的に、迅速に多数サンプルにおいて測定するために、フローサイトメトリーを用いた測定計の確立を行った。歯周病と変性脂質との関わりにおいて、歯肉溝滲出液中での変性脂質・酸化LDLの存在の証明が本質的な前提である。健常者および生活習慣病を有する歯周病患者からの生体サンプルとしてヒト歯肉溝滲出液を採取し(昭和大学歯学部医の倫理委員会承認済)、その過程において脂質、賛成脂質が不安定化することなく測定できるような、採取方法、輸送方法、保存方法の確立を行った。サンプル中の、タンパク質の定量法の確立、脂質含有量の測定方法の確立を行った。歯肉溝滲出液中にLDLが存在し、一部変性が生じ、酸化LDLが存在することが、特異的抗体を用いた免疫的発色法を用いて明らかとなった。また、ELISA法及びウエスタンブロット法を用い、サンプル中の、酸化LDL/LDLの比率を測定した。歯周状態を把握する一つの検査値として歯周ポケット深さが頻用されているが、酸化LDL/LDLの比率はポケットの深さがますと増加する傾向が認められた。しかし、サンプル数の不足やサンプル採取料が極めて少ないこと、日内変動などの影響により、統計学的に有意な相関を見いだすことはできなかった。さらなる検討が必要であると考え、サンプル採取の条件、被験者選定条件等を見直しつつ資料収集を進めるとともに、測定及び解析を継続している。

该研究计划旨在检查高胆固醇和氧化的LDL参与牙周组织和牙周疾病病理学。调节在体外细胞培养分析系统中研究的变性脂质的方法需要进行操作调整，并且使用金属离子作为催化剂稳定了使用金属离子来定性的氧化方法，从而确立了稳定的方法。产生了口服粘膜衍生的上皮细胞系，引入了用于AP-1或NF-KB-luciferase的报告基因，并建立了用于炎症反应的定量测量系统。此外，使用流式细胞术建立了测量表，以直接和快速测量培养细胞中培养细胞上清液中六种炎症细胞因子的蛋白质含量。必不可少的前提是在牙周疾病和贬低脂质之间的关系中存在于牙龈沟中存在变性的脂质和氧化的LDL的证明。人牙龈沟被作为来自健康个体的生物样本和与生活方式相关疾病的牙周疾病患者（经获得与生活方式相关疾病的牙周疾病患者的生物样本（经卫星大学牙科伦理委员会批准），并且在此过程中，建立了一种收集，运输和存储方法，以允许脂质和脂质进行测量而无需进行降临。建立了一种定量样品中蛋白质的方法，并建立了一种测量脂质含量的方法。使用特异性抗体通过免疫原性的发色法揭示了LDL存在于牙龈沟渗出液中，并且发生了部分变性，并且存在氧化的LDL。此外，使用ELISA和Western印迹方法测量样品中氧化的LDL/LDL的比率。牙周口袋的深度经常用作检查牙周条件的检查值，但是氧化的LDL/LDL的比率随着口袋的深度而增加。但是，由于缺乏样本数量，样本收集费极小以及每日波动的影响，我们找不到统计学上显着的相关性。考虑到需要进一步考虑，公司将继续收集材料，同时审查样本收集和主题选择条件的条件，并继续进行测量和分析。