多色細胞系譜追跡法を用いた歯肉接合上皮の細胞供給システムの解明と幹細胞の同定

利用多色细胞谱系示踪法阐明牙龈交界上皮的细胞供应系统并鉴定干细胞

• 批准号: 21K09899
• 负责人: 山本 松男
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09899/
• 关键词: 接合上皮; 歯周組織; 幹細胞; クローン細胞集団; 歯周病; 多色細胞系譜の追跡; 接合上皮; 歯周組織; 幹細胞; クローン細胞集団; 歯周病; 多色細胞系譜の追跡

接合上皮は歯頸部で歯面に密着し異物の侵入を防ぐことで自然免疫の中心的な役割を果す。SPF飼育環境のマウスに比較して、通常環境で飼育した同種マウスの接合上皮では炎症反応が亢進し細胞分裂も盛んであることが示されている。組織恒常性維持のために盛んな細胞分裂が知られているが、それを維持する幹細胞の存在や細胞供給システムの解明には至っていない。これまでに多色細胞系譜追跡法により、1つの幹細胞に由来するクローン細胞集団の可視化にとりくんできた。タモキシフェンによりCre発現を制御できるレインボウ蛍光発色マウスを用いた解析系を確立し、発色後24週で接合上皮の基底層から歯肉溝までの全ての細胞が単色となる事を明らかにし、1つの幹細胞に由来するクローン細胞集団であることを確認した。本研究の目的は、クローン細胞集団内で幹細胞を頂点とする細胞ヒエラルキーの視点から階層性を解析することである。H30-R2年度科研費基C「多色細胞系譜追跡法を用いた歯肉接合上皮幹細胞の探索」（本人代表）で構築したRosa26CreERT2/+×Rosa26rbw/+マウス解析系を用い、接合上皮の前頭断面では外側基底板を底辺とし、エナメル質に沿って歯肉辺縁までの三角形の領域がクローン細胞集団の概形であことが明らかとなった。BrdUおよびEdUを用いた細胞分裂の盛んな領域の解析では基底層やエナメル質に接する層で細胞分裂が盛んであった。接合上皮幹細胞はWnt反応性の細胞であるとの報告がなされたので、Wnt下流遺伝子の1つであるβカテニンを検出することで追試を行ったところ、外側基底板のエナメル質から最も離れた端にある増殖細胞で、βカテニン陽性細胞の確認が出来た。

连接性上皮通过接触颈部的牙齿表面并防止异物入侵，在先天免疫中起着核心作用。与SPF喂养环境中的小鼠相比，已经表明炎症反应和细胞分裂在正常环境中饲养的同种异体小鼠的共轭上皮中正在增殖。尽管已知细胞分裂在维持组织稳态方面有效，但尚未阐明维持其或细胞供应系统的干细胞的存在。到目前为止，多色细胞谱系跟踪已用于可视化从单个干细胞衍生的克隆细胞种群。我们使用彩虹荧光色的小鼠建立了一个分析系统，该分析系统可以使用他莫昔芬控制CRE表达，并揭示了从连接上皮的基础层到牙龈沟的所有细胞在颜色发育后24周都单色变为单色，证实它们是从一个干细胞中得出的克隆细胞。这项研究的目的是从干细胞在克隆细胞群体内是根尖的细胞层次结构的角度分析层次结构。使用使用H30-R2 C构建的ROSA26CREERT2/+ X ROSA26RBW/+鼠标分析系统，该系统使用H30-R2 C``搜索使用多色细胞谱系跟踪方法搜索牙龈连接上皮干细胞'（个人代表），它表明，与交界层的底层相同的底层均与底层的底层相同，该底层是层均基的，该底层是层的均值克隆细胞种群的轮廓揭示了牙龈边缘。在使用BRDU和EDU的细胞分裂活动区域的分析中，细胞分裂在基础层和与搪瓷接触的层中处于活性。据报道，共轭上皮干细胞是Wnt反应性细胞，因此我们通过检测β-catenin（Wnt的下游基因之一）进行了后续测试，并确认在外层基板边缘的增殖细胞中发现了β-catenin阳性细胞，该细胞与EnmelEl eymelemel的边缘相距较远。