DNAチップを用いたヒト有細胞セメント質由来細胞特異的遺伝子発現パターンの解析

使用 DNA 芯片分析源自人细胞牙骨质的细胞特异性基因表达模式

• 批准号: 13771309
• 负责人: 山本 松男
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771309/
• 关键词: セメント質; DNAチップ; 遺伝子発現; 骨芽細胞; セメント質; DNAチップ; 遺伝子発現; 骨芽細胞

平成14年度は、セメント質由来細胞および正常骨芽細胞で発現している遺伝子の発現について、配列既知のプローブ遺伝子を結合させたメンブレン型DNAアレイにより検出・比較した。遺伝子発現の包括的解析のため、セメント質由来細胞および正常骨芽細胞からトータルRNAの分離を行った。正常骨芽細胞に関しては、骨芽細胞分化のマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子、オステオカルシン遺伝子の発現を指標に判断し、前骨芽細胞から骨芽細胞へ分化段階であることが推察された。ヒト有細胞セメント質由来細胞に関しては、アルカリフォスファターゼ遺伝子の発現は骨芽細胞に比較すると低いことが確認された。それぞれの細胞から分離したRNAサンプルを33P-ATPで標識し、イメージアナライザーを用いて画像解析を行ったところ、約1100種類のうち、40種類の遺伝子について発現様式に差が認められた。通法に従いPCR法によりDNAアレイ解析の結果を確認したところ、セメント質由来細胞ではIGFBP2の発現が認められず、一方で正常骨芽細胞では強いシグナルを検出した。検討対象を広げ、同意を得た患者口腔内から採取した歯槽骨骨芽細胞、顎骨骨細胞とも比較検討したところ、やはり骨由来細胞ではIGFBP2の発現が認められ、IGFBP2がセメント質由来細胞と骨組織を構成する細胞との識別マーカーに利用できる可能性が示唆された。さらに、セメント質由来細胞、正常骨芽細胞、歯周組織より分離した歯根膜細胞、骨膜細胞、歯肉線維芽細胞、さらには免疫系細胞株で、セメント質形成をはじめ硬組織形成に深く関与すると考えられているGDF-5に対する検討したところ、歯根膜細胞やセメント細胞でプロテオグリカンの産生が増え、Bリンパ球系細胞でアポトーシスが誘導されることが判明し、これらは各細胞での遺伝子発現パターンの多様性を反映するものと推察された。

在2002年，检测到在牙骨质衍生细胞和正常成骨细胞中表达的基因的表达，并使用已键入已知序列探测基因的膜型DNA阵列进行了比较。将总RNA从牙骨质衍生的细胞和正常成骨细胞中分离出来，以全面分析基因表达。关于正常成骨细胞，碱性磷酸酶基因的表达和骨钙蛋白基因的表达是成骨细胞分化的标志物，它们被确定为指数，并且估计该阶段处于与骨细胞的分化阶段与骨细胞的分化阶段。对于人类细胞胶结的细胞，碱性磷酸酶基因的表达被证实低于成骨细胞。用33p-atp标记了与每个细胞分离的RNA样品，并使用图像分析仪进行了图像分析，并观察到大约1,100种类型的40个基因的表达模式差异。 DNA阵列分析的结果通过PCR根据一般方法证实，并且在牙骨质衍生的细胞中未观察到IGFBP2的表达，而在正常成骨细胞中检测到了强信号。这项研究被扩展并与从同意同意的患者的口腔中收集的牙槽骨成骨细胞和颌骨骨质细胞进行了比较，并且发现在骨源性细胞中也观察到IGFBP2表达也表明IGFBP2可以用来将IGFBP2的标记用作区分水泥质细胞的标记，从而区分骨骼延伸的细胞。此外，当我们研究GDF-5时，人们认为这与硬组织形成深深涉及，包括牙骨质衍生的细胞，正常成骨细胞，牙周韧带细胞，牙周膜细胞，牙龈骨膜成纤维细胞，成纤维细胞和免疫系统细胞，我们发现，我们发现牙周酸性细胞和蛋白质细胞的生产量会增加蛋白酶的生产。细胞估计这些细胞反映了每个细胞中基因表达模式的多样性。