CNRカドヘリンファミリー分子多様性の機能解析

CNR-钙粘蛋白家族分子多样性的功能分析

基本信息

批准号：
16700314
负责人：
先崎浩次
金额：
$ 2.37万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

CNRカドヘリン分子群は、高次脳機能に重要なFynチロシンリン酸化酵素の結合分子である多様化したカドヘリン型の受容体ファミリーである。CNRカドヘリン分子群はマウス脳に広く発現しており、神経細胞分画法および免疫電顕法によりシナプス部位に存在する。また、神経細胞ごとに組み合わせをもってCNR遺伝子が発現することが示されている。マウス個体発生過程においては大脳皮質皮質板における発現が認められ、大脳皮質形成機構に重要なReelinの受容体の一つとしての役割を担っている。CNRカドヘリン分子群はそのアミノ酸構造から接着分子としての機能が想定されるが、これまでCNRカドヘリン分子の細胞接着活性は明らかではなかった。そこで、CNR1をHEK293T細胞に強制発現させホモフィリックな細胞接着活性を調べたところCNR1を発現させた細胞においてカルシウム依存的な細胞接着能が認められ、また、その機能ドメインはReelin結合領域と同じEC1領域に存在した。しかしながら、CNR1の細胞接着能はCNR1を発現させていないHEK293T細胞との間にもみとめられ、ホモフィリックな結合性ではない可能性が示唆された。そこで、CNR1と結合するHEK293T細胞に既存のタンパク質の同定を試みβ1インテグリンとのヘテロフィリックな結合性が示された。また、マウス発生段階の小脳においてCNRタンパク質とβ1インテグリンタンパク質との局在の一致が認められ、マウス生体内においてもCNR分子とβ1インテグリン分子が結合して機能していることが示唆された。以上の結果はCNR分子がβ1インテグリン分子とヘテロフイリックな結合により細胞接着能を有すること、および、CNR分子がβ1インテグリン分子との結合により機能していることを示す。

CNR钙粘蛋白分子是多元化的钙粘蛋白受体家族，它们是Fyn酪氨酸磷酸化的结合分子，对于更高的脑功能很重要。 CNR钙粘蛋白分子基在小鼠脑中广泛表达，并通过神经元分馏和免疫电子显微镜存在于突触部位。还已经表明，CNR基因以每个神经元的结合表达。在本体基础小鼠的发作过程中，观察到大脑皮质板上的表达，并且它是reelin受体之一的作用，这对于脑皮质形成机制很重要。预期CNR钙粘蛋白分子的氨基酸结构可作为粘附分子起作用，但直到现在，CNR钙粘蛋白分子的细胞粘附活性尚未清楚。因此，当CNR1被迫在HEK293T细胞上表达CNR1并检查了同粒细胞粘附活性时，在表达CNR1的细胞中发现了钙依赖性的细胞粘附能力，其功能结构域与reelin结合区域在同一EC1区域中发现。但是，在不表达CNR1的HEK293T细胞之间检测到CNR1的细胞粘附能力，这表明它可能不是均匀的结合。因此，通过试图鉴定与CNR1结合的HEK293T细胞中的现有蛋白质来证明与β1整合素的杂质结合。此外，在小脑发育的发育阶段，在小脑中观察到CNR蛋白和β1整合素蛋白的定位，这表明CNR分子和β1整合素分子在小鼠体内相互结合。以上结果表明，CNR分子通过异哲学结合与β1整联蛋白分子具有细胞粘附能力，并且CNR分子通过与β1整合素分子结合而起作用。