脳構造形成機構に関わるCNR分子群の機能と系統進化の解析

脑结构形成机制中CNR分子群的功能和系统进化分析

基本信息

批准号：
14034264
负责人：
先崎浩次
金额：
$ 4.35万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry (2003)Okazaki National Research Institutes (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

(CNR1はβ1 Integrinを介した細胞接着活性能を有する)CNRはsynaptic Protocadherinファミリーに属する多様化した分子群であるが、その接着活性についてはほとんど知られていない。今回、HEK293T細胞に発現させたCNR1蛋白質の一部は細胞膜に存在し、Ca依存的細胞接着能を増加させることを見いだした。しかしながら、CNR1細胞外領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC-Fc)を用いたin vitroでの強いホモフィリックな接着活性は認められなかった。さらに、CNR1を発現させていない、HEK293T細胞がCNR1EC1領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC1[RGD]-Fc)との接着し、EC1内のRGD配列をポイントミューテーションによりRGEに変えた融合蛋白質CNR1 EC1[RGE]-Fcにおいては接着しなかったことより、接着性にEC1領域のRGD配列が関与することが明らかにされた。また、RGDSペプチドや抗β1 Integrin機能阻害抗体などのIntegrin分子機能阻害により、HEK293T細胞とCNR1 EC-Fcとの接着性は阻害される。また、CNR1を発現させたHEK293T細胞におけるCNR1蛋白質の局在と内在性のβ1 Integrin蛋白質の局在は一致し、さらに、シナプス発達過程にあるマウス小脳分子層におけるCNRとβ1 Integrinの局在様式は重なっている。以上の結果から、CNR1はβ1 Integrinとの間でヘテロフィリックなCa依存的な細胞接着活性を有することが明らかとなり、また、CNR-β1 Integrin相互作用による脳構造形成機構およびシナプス形成機構への関与が示唆される。

（CNR1通过β1整合素具有细胞粘附活性）CNR是属于突触蛋白蛋白家族的多元化分子群，但鲜为人知其粘附活性。这次，在HEK293T细胞中表达的某些CNR1蛋白存在于细胞膜中，发现CA依赖性细胞粘附能力增加。然而，使用CNR1细胞和人类免疫球蛋白FC区域之间的融合蛋白（CNR1 EC-FC），在体外没有强的同质性粘合剂活性。此外，不表达CNR1的HEK293T细胞粘在CNR1EC1区域和人类免疫球蛋白FC区域和EC1中的RGD序列之间的融合蛋白（CNR1 EC1 [RGD] -FC）结果表明，EC1区域中的RGD序列参与了粘合性能，而不是粘合剂在变化的融合蛋白CNR1 EC1 [RGE] -FC中。此外，整联蛋白分子功能抑制，例如RGDS肽和抗肌素整合素功能抑制性抗体可以抑制HEK293T细胞和CNR1 EC-FC之间的粘附性。此外，CNR1蛋白在表达CNR1的HEK293T细胞中的位置和β1整合素蛋白质的定位（内部性质）是一致的，并且在突触发育中小鼠小脑层中CNR和β1整合蛋白的局部样式处理。基于上述结果，很明显，CNR1在β1整合素之间具有异质CA依赖性细胞活性，并建议通过CNR-β1整合素相互作用参与大脑结构形成机理和突触形成机制。