水疱症をモデルとした表皮細胞接着構造解離の極性と蛋白リン酸化の関与の解析

使用大疱性疾病模型分析表皮细胞粘附结构解离的极性和蛋白质磷酸化的参与

• 批准号: 16790634
• 负责人: 江崎 智香子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790634/
• 关键词: 自己免疫性水疱; 尋常性天疱瘡; 落葉状天疱瘡; ケラチノサイト; デスモソーム; リン酸化; 自己免疫性水疱症

本研究は、落葉状天疱瘡抗体によって惹起されるデスモソーム構成分子間の結合の形態的変化と水疱部での細胞接着の離解における極性について尋常性天疱瘡との比較で解析し、その変化における蛋白質リン酸化の関与を検証することで、細胞骨格・接着分子の機能解析を重層上皮である皮膚の特性から細胞の極性に着目し行うものである。昨年度は水疱症患者の生体皮膚におけるデスモグレイン(Dsg)I, IIIを中心としたデスモソーム構成蛋白の分子間相互作用の形態的検討を、落葉状天疱瘡、および尋常性天疱瘡患者、健常人の3群に分け、それぞれ生検で得た皮膚組織の凍結薄切標本で、デスモソーム構成蛋白を二重染色し蛍光顕微鏡で観察した。落葉状天疱瘡では臨床症状の重症度によらず、Dsg Iは、細胞内領域に対する抗体でdot状に観察され、この所見は側面の水平方向の接着より、上下面の垂直方向の接着に関わる方向に偏在してより強く現れていた。本年度は症例数の集積と再現性を検討した。尋常性天疱瘡には抗Dsg I, III抗体が両方陽性の病型と抗Dsg III抗体のみ陽性の病型があるが、抗Dsg III抗体のみ陽性の症例において、Dsg I細胞内領域に対する抗体でdot状の変化が観察され、抗体結合後にデスモソーム構成分子間が相互に作用して変化する可能性を形態的に示唆する貴重な結果を得た。しかし、抗Dsg III抗体のみの尋常性天疱瘡症例の稀少さから同様の病型の検体を得ることが困難で追試がかなわなかった。そこで天疱瘡モデルマウスの口腔粘膜で検討したが、Dsg I細胞内領域に対する抗体でのdot状変化は観察できなかった。皮膚と口腔粘膜でのDsg I, IIIの局在と発現量の差の影響も否定できないため、今後はDsg I, III各々単独の抗体陽性症例での検討の集積が望まれるが、デスモソーム構成分子間の相互の関わりを強く期待する知見であると考えられた。

在本研究中，我们与寻常型天疱疮相比，分析了落叶型天疱疮抗体诱导的桥粒组成分子之间键的形态变化以及水疱区域细胞粘附解离的极性，通过验证磷酸化的参与，我们将分析其功能。细胞骨架和粘附分子，从皮肤的特征出发，重点关注细胞极性，皮肤是复层上皮。去年，我们对大疱性疾病患者、落叶型天疱疮和寻常型天疱疮患者以及健康受试者活体皮肤中桥粒组成蛋白（主要是桥粒糖蛋白 (Dsg) I 和 III）的分子间相互作用进行了形态学研究。他们被分成三组，每组都使用活检获得的皮肤组织冷冻切片进行桥粒构成蛋白的双染色，并在荧光显微镜下观察。在落叶型天疱疮中，无论临床症状的严重程度如何，Dsg I 都被观察为细胞内区域的点状抗体，这一发现与上下表面的垂直粘附而不是侧面的水平粘附有关。向不同方向分布不均匀，且出现较为强烈。今年，我们调查了病例数量和再现性。寻常型天疱疮有两种类型：一种是抗 Dsg I 和 III 抗体均呈阳性，另一种是仅抗 Dsg III 抗体呈阳性，观察到点状变化，提供了有价值的形态学结果，提示了这种可能性。桥粒组成分子在抗体结合后相互作用并发生变化。然而，由于仅有抗Dsg III抗体的寻常型天疱疮病例很少见，很难获得类似疾病类型的标本，无法进行后续试验。因此，我们研究了天疱疮模型小鼠的口腔粘膜，但使用抗Dsg I细胞内区域的抗体没有观察到点状变化。由于不能否认Dsg I和III在皮肤和口腔粘膜中的定位和表达水平的差异的影响，因此需要对单独的Dsg I和III中的每一个的抗体阳性病例进行累积研究。这一发现强烈表明。两者之间的相互关系。