水疱症をモデルとした細胞骨格・細胞接着制御におけるプロテインキナーゼCの役割

蛋白激酶 C 在大疱性疾病模型中调节细胞骨架和细胞粘附的作用

基本信息

批准号：
09770623
负责人：
江崎智香子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770623/
关键词：
PKC PKM ケラチン水疱症

项目摘要

細胞骨格・細胞接着系の構造分子は細胞外シグナルに対応し、細胞の分化増殖に深く関わっている。自己免疫性水疱症の1つである天疱瘡の水疱形成メカニズムにおいて、カルシウム依存性シグナル伝達とホスホリパーゼCの関与、プロテインキナーゼC(PKC)各アイソザイム間の発現および活性動態の差が示されてきた。本研究は、表皮細胞の細胞骨格・接着の動体構造に関してその障害である水疱症をモデルとし、天疱瘡抗体によって惹起される細胞骨格・細胞接着系の構造分子、特にケラチンおよびデスモソーム構造分子のPKCによるリン酸化を検討し、PKCによる機能的制御機構を、基礎的細胞生物学的に解明しようとするものである。本年度は、PKCの活性化を誘導すると考えられているホルボールエステルの1つである12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)を刺激として、ヒト有棘細胞癌由来培養DJM-1細胞におけるPKCおよびPKM(PKCの調節部分を欠いた活性部分Mキナーゼ)の局在を、PKCアイソザイム抗体を用いたウェスタンブロッティング法によって検討した。その結果、PKCαおよびηに対する抗体でPKMは検出されたが、PKCδおよびεには検出されなかった。PKMαは、細胞質、細胞膜、細胞骨格画分すべてに存在したが、PKMηは細胞質画分のみで観察された。さらにDEAE-Sephacel columnによってPKCとPKMを分離し各々の活性を測定したところ、細胞質画分において二峰性の活性がみられ、モノクローナル抗PKCa抗体を添加することにより活性の抑制がみられた。次いで、高濃度KCl不溶性画分(ケラチン画分)におけるPKCの発現とPKC活性の検討を行い、ケラチン画分でのPKCaおよびPKMa、PKCeの存在を観察した。以上より、ヒト表皮細胞において、PKMαおよびηが存在し、それらはリン酸化能を保持し、PKCおよびPKMがケラチン蛋白リン酸化制御に関与する可能性が示唆された。

细胞骨架和细胞粘附系统的结构分子对细胞外信号反应，并深深地参与细胞分化和增殖。一种自身免疫性的Bullosa Pemphigus中的水泡形成的机制已被证明涉及钙依赖性信号传导和磷脂酶C的参与，以及蛋白激酶C（PKC）同工酶之间的表达和活性动力学。 This study uses bullopathy, a disorder in the cytoskeleton and adhesion of epidermal cells, as a model, and examines the phosphorylation of structural molecules of the cytoskeleton and cell adhesion system, particularly keratin and desmosome structural molecules, which are induced by pemphigus antibodies, by PKC, and attempts to elucidate the functional regulatory mechanisms caused通过基础细胞生物系统的PKC。 In this year, we investigated the localization of PKC and PKM (active partial M kinase lacking the regulatory portion of PKC) in human squamous cell carcinoma-derived cultured DJM-1 cells by Western blotting using PKC isozyme antibodies, using 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA), one of the phorbol esters that is thought to induce the PKC的激活。结果，用针对PKCα和η的抗体检测到PKM，但没有使用PKCδ和ε。 PKMα存在于所有细胞质，细胞膜和细胞骨架级分中，而仅在细胞质分数中观察到PKMη。此外，当PKC和PKM通过DEAE-SEPHACEL柱分离并测量活性时，在细胞质分数中观察到双峰活性，并通过添加单克隆抗PKCA抗体来抑制活性。接下来，检查了PKC和PKC活性在高浓度的KCL不溶性馏分（角蛋白馏分）中的表达，并观察到角蛋白分数中PKCA，PKMA和PKCE的存在。从以上，已经提出PKMα和η存在于人表皮细胞中，并且它们保持磷酸化能力，并且PKC和PKM可能参与调节角蛋白蛋白磷酸化。