心筋アポトーシス細胞におけるチトクロームC放出機序の検討及び治療への応用

心肌细胞凋亡细胞色素C释放机制的研究及其治疗应用

基本信息

批准号：
13770355
负责人：
小原幸
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット心臓単離ミトコンドリアを用い、acidosis刺激・酸化刺激単独、及びCaCl2(50〜300μmol/L)の共投与によるCa^<2+>過負荷を行い、light scatteringによりミトコンドリアpermeability transition pore (PTP)開口の測定を行い、Western blottingによりミトコンドリアからcytochrome c放出を検討した。次に、これらに対するATP感受性K channel開口薬(diazoxide、pinacidil)の効果を検討した。<結果>Ca^<2+>は濃度依存性にPTPを開口し、ミトコンドリアからのcytochrome c放出を導いた。acidosis刺激(pH6.6)単独では、PTP開口は見られず、pH6.6ではCa^<2+>依存性のPTP開口は有意に減弱した。逆に、酸化ストレス(tBOOH25-200μM)は濃度依存性にPTPを開口し、さらにCa^<2+>はその作用を増強した。ATP感受性K channel開口薬は、濃度依存的にCa^<2+>過負荷によるPTP開口を抑制し、またミトコンドリアからのcytochrome c放出を抑制した。pH6.6条件下においても、Ca^<2+>依存性PTP開口に対するK channel開口薬の効果は同様に認められ、酸化ストレスにCa^<2+>過負荷を加えた条件下においても、K channel開口薬のPTP開口抑制作用は有意であった。<結語>本研究により、虚血再灌流障害時の有害因子であるCa^<2+>過負荷、酸化ストレス、acidosis刺激のうち、前2者はPTP開口増強に、後者はPTP開口抑制に働くことが示された。またK channel開口薬は、細胞内pHがacidosisとなる虚血時、及びradical産生が著しい再灌流時ともに、Ca過負荷によるミトコンドリアPTP開口を抑制し得ることが示された。

大鼠心脏分离的线粒体用于刺激性刺激性，单独氧化刺激和CACL2（50-300μmol/L）的共同给药，并通过光散射和细胞孔释放Mitochondririation测量了CACL2（50-300μmol/L）的共同给药。接下来，研究了对ATP敏感的K通道开放剂（二氮二醇）对它们的影响。 <结果> Ca^<2+>以浓度依赖性方式打开PTP，从而导致细胞色素C从线粒体释放。酸中毒刺激（pH 6.6）单独显示没有PTP光圈，在pH 6.6时，Ca^<2+> - 依赖性PTP孔径显着降低。相反，氧化应激（TBOOH25-200μM）以浓度依赖性方式打开PTP，而Ca^<2+>进一步增强了其效果。 ATP敏感的K通道开瓶器以浓度依赖的方式抑制了CA^<2+>过载引起的PTP开口，并抑制了从线粒体中释放的细胞色素C。在pH 6.6条件下类似地观察到K通道开放药物对Ca^<2+> - 依赖性PTP开放的影响，并且即使在Ca^<2+>过载的条件下，k通道开放药物的PTP开放抑制作用也很重要。 <结论>这项研究表明，在Ca^<2+>过载，氧化应激和酸中毒刺激中，它们在缺血 - 重新灌注损伤过程中是有害因素，前两个是PTP开放增强的作用，而后者作为PTP开放抑制作用。还已经表明，K通道开启器可以抑制由CA超负荷引起的线粒体PTP的开口，这是在缺血期间，当细胞内pH值为酸中毒时，并且在自由基产生显着时再灌注期间。