アポトーシス心筋細胞に対する貧食機序の検討

凋亡心肌细胞吞噬机制的检查

• 批准号: 11770356
• 负责人: 小原 幸
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770356/
• 关键词: Apoptosis; 心筋細胞; apoptosis

本年度はin vitro培養心筋細胞及び、in vivo心筋梗塞モデルを用い、アポトーシス細胞の表面抗原の変化及び、ケモカイン産生を検討した。I)in vitro培養心筋細胞での検討〈方法〉 新生仔ラット培養心室筋細胞に、staurosporinを4時間添加し、アポトーシスを誘導した。Hoe33258染色にてアポトーシスを評価した。細胞表面抗原の検索として、抗主要組織適合抗原(MHC)classII抗体染色を行い、ケモカイン産生を評価する目的で、抗IL-8抗体による免疫染色を行った。〈結果〉 staurosporin投与により16.9±2.8%の心筋細胞にアポトーシスが誘導された。表面抗原の検討においては、staurosporin投与で、MHC classII染色陽性細胞が増加する傾向にあった。また、ケモカイン産生に関しては、Hoe33258とIL8の二重染色を行ったが、アポトーシス細胞にIL8産生は認めなかった。II) in vivo心筋梗塞モデルでの検討。〈方法〉 ラット左冠動脈を30分結紮後24時間再灌流し、再灌流後の心臓を組織学的検討に供した。心筋アポトーシスはTUNEL染色にて検討した。また、アポトーシス細胞のケモカイン産生能を検討するため、抗IL8抗体、抗MCP1抗体で免疫染色を行った。〈結果〉 心筋梗塞壊死巣周辺部にアポトーシス細胞を19.4±0.9%認めた。抗IL8抗体染色は、浸潤細胞に陽性を認めたのみであった。一方、抗MCP1抗体染色は単球、血管平滑筋細胞、及び梗塞周辺部心筋細胞において陽性であり、TUNELとの二重染色において、TUNEL陽性細胞の55.8±3.9%の心筋細胞がMCP1染色陽性であった。昨年度、同様の心筋梗塞モデルで梗塞周辺領域においてMHC classII抗原の発現を報告している。以上の結果より、心筋アポトーシスにおいて、MHC classII抗原の発現により膜表面の抗原性に変化を来たし、かつ、MCP1産生により細胞除去を受けやすい条件を提供している可能性が考えられた。

今年，我们使用体外培养的心肌细胞和体内心肌梗死模型研究了凋亡细胞和趋化因子产生表面抗原的变化。 i）将体外培养的心肌细胞<methots <方法>添加到新生大鼠培养的心室心肌细胞中4小时以诱导凋亡。用HOE33258染色评估凋亡。作为对细胞表面抗原的搜索，进行了抗毛舍组织相容性抗原（MHC）II类抗体染色，并使用抗IL-8抗体进行免疫染色，以评估趋化因子的产生。 <结果>星形孢菌素给药诱导16.9±2.8％的心肌细胞凋亡。在对表面抗原的研究中，施用星形孢菌素倾向于增加MHC II类阳性细胞的数量。此外，关于趋化因子的产生，HOE33258和IL8进行了双重染色，但在凋亡细胞中未观察到IL8的产生。 ii）在心肌梗塞模型中研究。方法：结扎后大鼠左冠状动脉进行30分钟和24小时的重生，再灌注后的心脏进行组织学检查。通过TUNEL染色检查心肌凋亡。此外，为了研究凋亡细胞的趋化因子产生能力，使用抗IL8和抗MCP1抗体进行免疫染色。在心肌梗死坏死性坏死性绒毛周围的区域中观察到<19.4±0.9％的凋亡细胞。抗IL8抗体染色仅在浸润细胞中显示阳性结果。另一方面，抗MCP1抗体染色在梗塞中的单核细胞，血管平滑肌细胞和外周手肌细胞中为阳性，而TUNEL的双重染色为55.8±3.9％的TUNEL阳性细胞的心肌细胞的MCP1阳性细胞为阳性。去年，类似的心肌梗塞模型报道了在障碍区域中MHC II类抗原的表达。从以上结果来看，在心肌凋亡中，MHC II类抗原的表达可能会改变膜表面的抗原性，并且MCP1产生提供了易受细胞去除的条件。