神経-シュワン細胞間に形成されるタイトおよびギャップ結合の再生における役割

神经和雪旺细胞之间形成的紧密连接和间隙连接在再生中的作用

基本信息

批准号：
13770014
负责人：
出沢真理
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

末梢神経移植による視神経再生の際に、神経細胞とシュワン細胞の間において、本来は同種細胞の間にのみ見られるはずのtight junctionとgap junctionが形成される.この特異なjunctionの神経再生における役割を様々な手法を用いて明らかにし、接着構造蛋白の遺伝子発現をin vivoの視神経再生系において操作し、視神経再生の動態を解析した.培養シュワン細胞を用いた人工移植片の作成であるが、生後1-3日の新生仔ラット脊髄後根神経節よりシュワン細胞を離離・培養し細胞外基質、神経栄養因子と共に物質過性チューブに充填して人工移植片を作成する条件を設定した.またかかる移植片を成体ラットの切断坐骨神経及び視神経に移植して再生を確認した。occludin並びにconnexin32,43の導入遺伝子を細胞レベルで培養シュワン細胞に導入し移植を行った.また網膜神経節細胞への遺伝子導入方法はelectroporation法を改変し実際の生体眼における遺伝子導入の実現にむけて独自の開発を行なった.全域で平均50%、網膜中心部で70-80%という高率の遺伝子導入に成功し、組織傷害や副作用が起きないことを確認し、同様に遺伝子を網膜神経節細胞に導入した.視神経再生率・再生速度は硝子体に注入したコレラトキシンサブユニットBの順行性標識した再生視神経の追跡によって評価した。シュワン細胞に上記の遺伝子を導入した場合、また網膜神経節に導入した場合、共に遺伝子を導入しなかったものとの比較においてわずかながらの視神経再生率・再生速度の向上が見られたものの統計的な有意差は認められなかった。

在通过周围神经移植进行视神经再生的过程中，神经元和雪旺细胞之间会形成紧密连接和间隙连接，这通常只在同种异体细胞之间才能看到。这种独特的连接在神经再生中的作用我们使用了各种方法来阐明基因表达粘附结构蛋白。我们在体内操纵视神经再生系统并分析了视神经再生的动力学。我们使用培养的雪旺细胞创建了人工移植物，我们通过解离和培养它们并将其填充到细胞外基质和神经营养因子中来设定创建人工移植物的条件。我们还将这些移植物移植到成年大鼠被切断的坐骨神经和视神经中，以使其再生。我们在细胞水平上将occludin和connexin32,43的转基因导入培养的雪旺细胞中并进行移植。此外，我们修改了电穿孔方法将基因导入视网膜神经节细胞，旨在实现将基因导入到实际的活体眼睛中。出去。我们成功地以平均 50% 的高转染率成功转染了该基因，在视网膜中央转染率为 70-80%，并确认没有发生任何组织损伤或副作用。我们还将该基因转染到视网膜神经节细胞中。再生速度通过用注射到玻璃体中的霍乱毒素亚基B的顺行标记追踪再生视神经来评估。当将上述基因引入雪旺细胞和视网膜神经节时，与未引入基因的情况相比，观察到视神经再生率和再生速度略有改善，但没有观察到显着差异。