培養シュワン細胞移植による損傷視神経の再生促進手段の開発

开发一种通过移植培养的雪旺细胞来促进受损视神经再生的方法

基本信息

批准号：
09771410
负责人：
出沢真理
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

末梢神経に含まれるシュワン細胞には視神経再生の促進作用があることを、これまで明らかにしてきた.そこで視神経の再生率の向上を計るためにシュワン細胞を単離培養し、人工的移植片を作成することを目的とした.研究方法としては新生仔ラット(Wistar種)脊髄後根神経節よりシュワン細胞を単離・培養し、細胞数約106/mlとなるように細胞外基質を80%、神経成長因子BDNF、NT-4,NGFを50ng/ml濃度にて調整し、内径1mmのシリコンチューブへの充填によって人工移植片を作成した.成熟ラット(Wistar種)の視神経を眼窩内で切断し人工移植片を眼球側視神経に移植した.る視神経再生の評価として免疫組織化学、電子顕微鏡等を用いて観察した.移植片内へのDil投与によって網膜神経節細胞を逆行性標識し、生存・再生した細胞数を無処置の対象群と比較し、生存率をMacintosh NIH imageを用いて解析した.術後2週および3週において、視神経線維が人工移植片内に伸長しているのが確認された.また、人工移植片内の神経線維にGAP43の局在を認め、L1,NCAMの細胞接着因子を発現していることがneurofilamentとの2重染色によって示された.またミエリン蛋白MAGに関しては、術後2週目以降において陽性線維が人工移植片内に確認された.電子顕微鏡では移植片内の多くの再生線維がシュワン細胞と接触しており、細胞外基質成分のなかを伸長する像は認められなかった.移植片内Dil投与による網膜神経節細胞の逆行性標識において約20%前後の生存・再生率を認めた.これらの結果より培養シュワン細胞を用いて人為的に作成した人工移植片の環境であっても視神経の再生が誘導可能であること、また末梢神経移植による再生時同様、シュワン細胞を足場として伸長しており、L1,NCAM等の細胞接着因子の発現が見られた.再生線維においてMAGの発現もあることから、人為的環境内であってもミエリン化が起きる可能性が示唆された.

我们之前已经证明周围神经中含有的雪旺细胞具有促进视神经再生的能力。为了提高视神经再生率，我们分离培养雪旺细胞并制作人工移植物。研究方法是从新生大鼠（Wistar种）脊髓背根神经节中分离培养雪旺细胞，加入80%细胞外基质和神经生长因子BDNF，使细胞数量约为106/ml，NT-4。神经生长因子将浓度调至50ng/ml，装入内径1mm的硅胶管中，制备人工移植物。在成年大鼠（Wistar种）的眼眶中切开视神经，将人工移植物装入内径1mm的硅胶管中。被植入眼球一侧的视神经。使用免疫组织化学、电子显微镜等评估再生。通过将Dil施用到移植物中来逆行标记视网膜神经节细胞，并将存活和再生细胞的数量与未处理的Macintosh存活率进行比较。 NIH术后2周和3周，证实视神经纤维延伸至人工移植物中。此外，GAP43定位于人工移植物内的神经纤维中，已知神经纤维表达细胞粘附因子L1和NCAM。此外，术后2周后，在人工移植物内确认了髓磷脂蛋白MAG的阳性纤维。电镜显示，在雪旺氏移植物内发现了许多再生纤维，它与细胞接触并延伸穿过细胞外基质成分。。在通过移植物内施用Dil对视网膜神经节细胞进行逆行标记时，没有观察到图像，即使在人工移植物的环境中也观察到约20%的存活/再生率。此外，与周围神经移植再生的情况一样，利用雪旺细胞作为支架进行伸长，并且在再生纤维中也观察到L1和NCAM等细胞粘附因子的表达，表明人工环境。有人认为，髓鞘形成甚至可能发生在体内。