毛細血管拡張性運動失調症の酵母による大規模スクリーニング法の開発とその応用

共济失调性毛细血管扩张酵母大规模筛查方法的建立及其应用

基本信息

批准号：
13877158
负责人：
水谷修紀
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877158/
关键词：
ATM フレームシフトがん体質

项目摘要

毛細血管拡張性小脳失調症の原因遺伝子ATMの遺伝子異常の多くはストップ変異、あるいはそれを伴うフレームシフト変異である。我々は酵母の栄養要求性を利用した、大規模スクリーニングアッセイ法を開発し、論文を発表した(R.Tsuchida et al. Radiation Res印刷中)。この方法の信頼性を確認する目的で既に変異部位とその内容の明らかにされているAT患者由来細胞で8個の代表的な細胞株を選んで、解析した。その結果、本方法の信頼度が非常に高いことを明らかにした。さらに小児腫瘍性疾患の遺伝的背景要因としてのATM異常の関与を明らかにする目的で小児ホジキン病、乳児白血病患者などの正常体細胞の解析を行い、前者で6/15,後者で2/8の頻度で遺伝子異常が存在することを明らかにした。また、世界で唯一のDNA-PK欠損株として知られるM059JとDNA-PK正常株であるM059KについてATM異常の有無を比較検討した。その結果M059Jにおいて2種類のnonsense associated abnormal splicingの発現を認めた。このような異常なsplicingの原因となるゲノム異常を検索し、イントロン33の中に同定した。かくて今回開発された酵母法は多数の臨床検体の解析に有用であるばかりでなく、発がん体質の発見や癌細胞の特性の解析にも有用であることが明らかになった。

负责远程降低小脑共济失调的ATM基因中的许多基因异常是伴随它们的停止突变或移料突变。我们开发了一种大规模筛选测定法，该测定法利用了酵母菌的合理性，并发表了一篇论文（R. Tsuchida等人的辐射RES在印刷中）。为了确认该方法的可靠性，选择了八种代表性的细胞系，并根据从患者中得出的细胞进行分析，该细胞已经显示出突变位点及其含量。结果，揭示了该方法的可靠性很高。此外，我们分析了正常的体细胞细胞，例如小儿霍奇金氏病和儿童疾病的婴儿白血病患者，并揭示了前者的遗传异常的频率为6/15，而后者则为2/8。此外，我们比较并检查了世界上唯一的DNA-PK缺陷菌株M059J和正常DNA-PK菌株M059K是否具有任何ATM异常。结果，在M059J中观察到了两种相关的异常剪接的表达。在内含子33中搜索并鉴定出引起这种异常剪接的基因组异常。因此，已经揭示了这次开发的酵母方法不仅有用，这不仅有助于分析许多临床样本，而且对于检测癌变和癌细胞的性质分析。