先天性免疫不全症成立におけるIg遺伝子プロモ-タ-結合たん白の意義に関する研究

Ig基因启动子结合蛋白在先天性免疫缺陷病发病中的意义研究

基本信息

批准号：
02807235
负责人：
水谷修紀
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807235/
关键词：
OCT2 RTーPCR CSFー1 cーfms U937 in vitro trans lation

项目摘要

Ig遺伝子プロモ-タ-結合たん白であるOCT2たんぱくのmRNAの発現をみるためにreverse transcriptase Polymerase Chain Reaction(RTーPCR)法を開発した。種々の造血細胞でこの遺伝子の発現を解析したところ、リンパ系の細胞における強い発現をみた。この発現がfms遺伝子導入ーCSFー1刺激B細胞でも同様に認められるかいなかを検討するためにcーfms遺伝子のレトロウィルスを作製した。cーfms遺伝子(Dr.Sherrより供与)cDNAをPzip SV(X)neoベクタ-のBamHIサイトに導入し、パッケ-ジング細胞株である4cripにトランスフェクトした。cーfmsレトロウィルスのタイタ-を測定する為にヒト上皮細胞株であるKM13に導入し、neomycineで選拓したところ1×10^3/mlのウィルスタイタ-を得た。ヒト単球細胞株であるU937細胞にこのウィルスを感染させ、neomycineにより選拓することによってcーfms導入U937株を10株作製した。この細胞を60U/mlのCSF1(Immunexより供与)存在下で培養することによってcーfmsを介するシグナルがU937細胞をマクロファ-ジに分化させることを確認した。TPA処理によってマクロファ-ジへと誘導されたU937ではcーfmsの発現がPCRによっても確認できないことから、TPAを介する径路とは異った径路の役割りがcーfmsの径路には存在すると考えられた。現在このU937におけるOCT2 mRNAの発現の変化を解析すると同時に、EBウィルス形質転換B細胞にcーfmsを導入する計画を実施中である。これらの系におけるOCT2 mRNAの変化を解析してみたい。又先天性免疫不全症患者リンパ球については患者検体を収集中である。

开发了一种逆转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）方法，以查看IG基因启动子结合蛋白Oct2蛋白的mRNA表达。该基因的表达在各种造血细胞中进行了分析，并被发现在淋巴样细胞中很强。为了研究该表达在FMS基因转染CSF-1刺激的B细胞中是否类似地观察到，产生了C-FMS基因的逆转录病毒。将cDNA（由Sherr博士捐赠）引入了PZIP SV（X）Neo Vector的BAMHI位点，并转染到4 Crip（包装细胞系）中。为了测量C-FMS逆转录病毒的滴度，将细胞引入人类上皮细胞系KM13中，并使用新霉素选择以获得1×10^3/ml病毒滴度。该病毒被人类单核细胞系U937细胞感染，并使用新霉素选择创建10种诱导C-FM的U937菌株。通过在存在60 U/ml CSF1（由Immunex捐赠）的情况下培养细胞，可以证实，通过C-FMS信号将U937细胞分化为巨噬细胞。由于C-FM的表达无法通过PCR在U937中通过TPA处理诱导到巨噬细胞中的表达，因此人们认为，在C-FMS的途径中存在与通过TPA的途径不同的途径的作用。目前，我们目前正在进行U937中OCT2 mRNA表达的变化，并实施了将C-FMS引入EB病毒转换的B细胞的计划。我想分析这些系统中OCT2 mRNA的变化。还为患有先天免疫缺陷患者的淋巴细胞收集了患者标本。