血球の分化と生存における細胞周期制御蛋白p21の新しい機能に関する研究

细胞周期调控蛋白p21在血细胞分化和存活中的新功能研究

基本信息

批准号：
11877173
负责人：
水谷修紀
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877173/
关键词：
p21 CKI Cytoplasm Apoptosis MAP kinese ASKI Monocyte GFP NLS

项目摘要

我々は細胞周期阻害因子p21が細胞質に発現することにより、アポトーシス阻害作用を発揮すること、.そのメカニズムとしてMAPKKKであるASK1が少なくとも1つの標的分子であることを昨年報告した(Asada et a1,EMBO J,1999)。今回我々は亜鉛誘導によらない恒常的に細胞質p21(DNLS-p21)を発現する新たなBaf3(IL-3依存性pro-B細胞株)およびU937細胞を樹立した。これらの細胞株を用いて、DNLS-p21と他の細胞周期制御因子との関係およびアポトーシス抵抗性について検討した。DNLS-p21はサイクリンD,E,AやCDK2と結合できたが、PCNAとは結合できなかった。L-3存在下ではモック細胞とDNLS-p21発現細胞のアポトーシス感受性に変化は見られなかったが、IL-3非存在下においては抗がん剤や酸化的ストレスによるアポトーシスに対してDNLS-p21発現細胞は有意に抵抗性を獲得していた。酸化的ストレスの際、アポトーシス特異的なMAPキナーゼ経路の活性化も抑制していた。以上の結果より、細胞質p21は単球系のみならずリンパ球系の細胞においてもアポトーシス阻害作用があることが判明した。このシステムは、アポトーシス特異的MAPキナーゼ経路の標的分子の同定の有用な手段となるのではないか、と考える。単球の分化の過程でどのようにしてp21が細胞質に発現するようになるのか。今年我々はこのヒントをつかんだ。p21の核内移行シグナルを含むGFP融合蛋白を単球系前駆細胞WEHI3BD+に発現させたところ、GFPのシグナルは核にのみ見られた。この細胞をビタミンD3で分化誘導するとGFPのシグナルが核のみではなく細胞質にも見られるようになった。この結果から単球への分化に伴ってp21の核移行シグナルをモジュレートする分子が発現してくるのではないかと考えられた。今後、この分子の同定をする予定である。

我们报道说，去年的细胞周期抑制剂P21通过表达其细胞质来施加其凋亡抑制作用，而MAPKKK ask1作为其机制至少是一个靶标分子（ASADA et A1，EMBO J，1999）。在这里，我们在没有锌诱导的情况下建立了新的BAF3（IL-3依赖性Pro-B细胞系）和U937细胞，这些细胞表达细胞质P21（DNLS-P21）。这些细胞系用于研究DNLS-P21与其他细胞周期调节剂与凋亡耐药性之间的关系。 DNLS-P21能够与细胞周期蛋白D，E，A和CDK2结合，但不能与PCNA结合。尽管在L-3存在下模拟细胞和表达DNLS-P21细胞的凋亡敏感性中未发现任何变化，但DNLS-P21表达DNLS-P21的细胞对IL-3缺乏抗癌药物和氧化应激引起的凋亡具有显着抗性。在氧化应激期间，它还抑制了细胞凋亡特异性MAP激酶途径的激活。以上结果表明，细胞质p21不仅在单核细胞中，而且在淋巴细胞细胞中都具有抑制作用。我相信该系统可能是识别凋亡特异性MAP激酶途径的靶标分子的有用工具。在单核细胞分化过程中，p21如何在细胞质中表达？今年，我们接受了这个技巧。当在单核细胞祖细胞细胞WEHI3BD+中表达含有P21的核转运信号的GFP融合蛋白时，仅在细胞核中发现GFP信号。当这些细胞与维生素D3分化时，不仅在细胞核中而且在细胞质中也发现了GFP信号。该结果表明，调节p21的核易位信号的分子将以分化为单核细胞表示。我们计划将来识别该分子。