変異p53陽性p190タイプPh白血病細胞株における細胞死の分子機構

突变型p53阳性p190型Ph白血病细胞系细胞死亡的分子机制

• 批准号: 04807180
• 负责人: 水谷 修紀
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04807180/
• 关键词: bcl-2; IL-6; p190BCR; ABL; アポプトーシス; BCL-2

p53変異を有するp190BCR/ABL細胞株(KOPM30)の細胞死のメカニズムについて我々はいくつかの興味ある知見を得た。KOPM30はIL6刺激により約10-15%の分画で細胞死が誘導される。KOPM30には細胞内のbcl-2発現の強いものと弱いものの2相性が認められ、IL-6刺激によってbcl-2発現の弱い分画が消失した。bcl-2発現と細胞死の関連を明らかにする目的でレトロウイルスベクターにヒトbcl-2cDNAを組み込みこのウイルスによりKOPM30を形質転換し、bcl-2を約20倍強く発現するKOPM30-B5をクローニングした。この細胞をIL-6存在下で培養すると細胞死は全く誘導されなかった。このことはIL-6が増殖因子として作用するためには細胞内bcl-2発現に裏打ちされていることが必要とされていることを示唆していた。そこでbcl-2翻訳開始コドンを含む20bpのantisense fragmentを発現ベクターに組み込んだものを作成し、これをU937細胞株に導入した(AS-U937)。AS-U937をIL-6で刺激したところ顕著な細胞死を誘導することができた。現在CD20抗原を発現するプラスミドとbcl-2antisense plasmidとのcotransfectionによるアッセイ系を確立しているところであるが、我々の今回の実験結果はIL-6などの増殖因子が細胞増殖作用を発揮するためにはそのレセプター発現が認められることと同時に細胞内におけるbcl-2などの生存因子の発現が必要とされていることを物語っており、サイトカイン研究における新しい視点を提供するものと考えられる。

我们在携带p53突变的P190BCR/ABL细胞系（KOPM30）中获得了一些有趣的发现。 KOPM30通过IL6刺激诱导大约10-15％的分数中的细胞死亡。 KOPM30在细胞中强和弱BCL-2表达之间显示出双相，而IL-6刺激消除了Bcl-2表达的弱分子。为了阐明Bcl-2表达与细胞死亡之间的关联，将人Bcl-2 cDNA掺入逆转录病毒载体中，并使用该病毒转化KOPM30，然后将BCL-2的KOPM30-B5转化为强烈强烈地表达BCL-2的强度约20倍。在存在IL-6的情况下培养细胞不会诱导任何细胞死亡。这表明IL-6需要得到细胞内Bcl-2的表达来支持，以充当生长因子。因此，将包含Bcl-2翻译起始密码子的20 bp反义片段纳入了表达载体，并将其引入U937细胞系中（AS-U937）。用IL-6刺激AS-U937允许诱导明显的细胞死亡。我们目前正在使用表达CD20抗原和Bcl-2触及质粒的质粒之间的共转染建立一个测定系统，而我们当前的实验结果表明，为了使IL-6（例如IL-6）施加细胞增殖，其受体表达是必需的，同时需要在细胞中进行诸如BCL-2的表达，从而提供了一种新的研究。

项目成果

Miyamura K,Mizutani S.: "Long persistent bcr-abl positive transcript detected by polymerase chain reaction after marrow transplant for chronic Myelogenous Leukemia without clinical relapse:a study of 64 patients." Blood. 81. 1089-1093 (1993)

Miyamura K、Mizutani S.：“慢性粒细胞白血病骨髓移植后聚合酶链反应检测到长期持续的 bcr-abl 阳性转录本，无临床复发：一项针对 64 名患者的研究。”

Miyashita T,Mizutani S.: "Molecular diversification of dominant subclones in vivo and in vitro Ph-positive ALL." Leukemia. 17. 586-592 (1993)

Miyashita T，Mizutani S.：“体内和体外 Ph 阳性 ALL 显性亚克隆的分子多样化。”

T.Miyashita S.Mizutani et al.: "Monoclonal proliferation of blast cell in transient Myeloproliferative Disorder (TAM) in Down syndrome." in Modern Trends in Human Leukemia 11 Sprinfer-Verlag, 5 (1992)

T.Miyashita S.Mizutani 等人：“唐氏综合症中短暂性骨髓增殖性疾病 (TAM) 中母细胞的单克隆增殖。”

K.Miyashita S.Mizutani et al.: "Long persistent bcr-abl positive transcript detected by polymerase chain reaction after marrow transplant for chronic myelogenous leukemia without clinical relapse:a study of 64 patients." Blood in press. (1992)

K.Miyashita S.Mizutani 等人：“慢性粒细胞白血病骨髓移植后聚合酶链式反应检测到长期持续的 bcr-abl 阳性转录本，无临床复发：一项针对 64 名患者的研究。”

S.Mitani S.Mizutani et al.: "bcl-2 gene rearrangement analysis of Japanese follicular lymphomas by polymerase chain reaction in formalin fixed paraffin-embedded tissue speciments." Jpn.J.Cancer Res.84. 37-41 (1993)

S.Mitani S.Mizutani 等人：“通过福尔马林固定石蜡包埋组织样本中的聚合酶链反应对日本滤泡性淋巴瘤进行 bcl-2 基因重排分析。”