TNFにより誘導される遺伝子群の同定とその治療への応用

TNF诱导基因组的鉴定及其治疗应用

• 批准号: 13204080
• 负责人: 中野 裕康
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204080/
• 关键词: TNF; アポトーシス; NF-κB; ノックアウトマウス; TRAF; MEF; マイクロアレイ; レトロウイルス

TNFはある種の腫瘍細胞にはアポトーシスを誘導することが知られているが、大多数の他の細胞にはアポトーシスを誘導せず、むしろ炎症性サイトカインの産生や接着因子などの発現上昇を誘導することから、TNF刺激時にはアポトーシスを誘導するシグナル伝達経路と同時に抗アポトーシス遺伝子の誘導がもたらされると考えられている。しかしながら、このような多彩な機能を有するTNFにより誘導される遺伝子群については完全には明らかにされていない。我々の作製したTNF receptor-associated factor(TRAF)5/TRAF2のダブルノックアウトマウス(DKO)由来の胎児線維芽細胞(MEF)はTNF刺激によるNF-κBの活性化の障害とTNF誘導性細胞死に対する感受性の亢進が認められる。そこでcDNAマイクロアレイを用い、野性型およびDKO由来のMEF細胞をTNF刺激することにより誘導される遺伝子群の発現パターンを検討し、DKO MEFで特異的に発現の低下した遺伝子群をcDNAマイクロアレイを用いて同定することを目的とした。約2万個の遺伝子のスポットされたマイクロアレイを用いた解析の結果、数百個以上の遺伝子がDKO MEFで発現の低下が認められた。そのなかでも候補遺伝子として選択した数十個の遺伝子群のノーザンブロット解析を行い、現在までに未知の遺伝子を含む8個の遺伝子で、野性型に比較しDKO MEFで顕著に発現の減少していることを確認した。そこでこれらの遺伝子のなかで抗アポトーシス機能を発揮する可能性のあるものをレトロウイルスベクターを用いてDKO MEFに遺伝子導入したが、TNF誘導性細胞死に対して抵抗性を獲得するには至らなかった。今後さらにスクリーニングを行っていく予定である。また今後はマイクロアレイ解析以外に、DKO MEFにレトロウイルスベクターで構築したcDNAライブラリーを導入し、TNF誘導性細胞死に抵抗性となるクローンを同定するというような機能的なスクリーニング方法も加えることにより、TNFにより誘導される抗アポトーシス作用の全貌を明らかにしていきたいと思っている。

尽管已知TNF在某些肿瘤细胞中诱导凋亡，但它不会在大多数其他细胞中诱导凋亡，而是诱导炎症细胞因子的产生和粘附因子的表达增加，并且被认为会导致诱导抗凋亡基因诱导凋亡途径的刺激性刺激TNF时的抗凋亡基因的诱导。但是，具有多种功能的TNF诱导的基因组尚未得到充分阐明。我们发现，我们从TNF受体相关因子（TRAF）5/TRAF2的双基因敲除小鼠（DKO）制造的胎儿成纤维细胞（MEF）被发现通过TNF刺激损害了NF-κB的激活，并且对TNF诱导的TNF诱导的细胞死亡的敏感性增加。因此，目的是研究使用cDNA微阵列刺激野生型和DKO衍生的MEF细胞诱导的基因的表达模式，并使用cDNA微阵列在用DKO MEF表达时明确降低了基因。使用约20,000个基因的斑点微阵列进行分析表明，数百个或更多基因降低了DKO MEF的表达。其中，我们对被选为候选基因的数十个基因进行了北印迹分析，并确认包括未知基因在内的八个基因在DKO MEF中的表达显着降低了，与野生类型相比。因此，在这些可能发挥抗凋亡功能的基因中，使用逆转录病毒载体转移到DKO MEF中，但该组没有对TNF诱导的细胞死亡产生抗性。我们计划将来继续进一步放映。除了微阵列分析外，我们还要通过将带有逆转录病毒载体构建的cDNA库引起的DKO MEF构建的cDNA库，并阐明对TNF诱导的细胞死亡具有抗性的克隆，从而阐明了TNF引起的抗凋亡效应的全部程度。

项目成果

Tada, K.: "Critical Roles of TRAF2 and TRAF5 in Tumor Necrosis Factor-induced NF-κB Activation and Protection from Cell Death"J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Tada, K.：“TRAF2 和 TRAF5 在肿瘤坏死因子诱导的 NF-κB 激活和防止细胞死亡中的关键作用”J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Seino, K.: "Protection against Fas-mediated and tumor necrosis factor receptor 1-mediated liver injury by blockade of FADD without loss of nuclear factor-κB activation"Ann Surg. 234. 681-688 (2001)

Seino, K.：“通过阻断 FADD 来防止 Fas 介导和肿瘤坏死因子受体 1 介导的肝损伤，而不丧失核因子-κB 激活”Ann Surg。

Matsushima, A.: "Essential role of nuclear factor (NF)-κB-inducing kinase and inhibitor of κB (IκB) kinase α in NF-κB activation through lymphotoxin β receptor, but not through tumor necrosis factor receptor I"J Exp Med. 193. 631-636 (2001)

Matsushima, A.：“核因子 (NF)-κB 诱导激酶和 κB (IκB) 激酶 α 抑制剂在通过淋巴毒素 β 受体激活 NF-κB 中的重要作用，但不通过肿瘤坏死因子受体 I”J Exp Med . 193. 631-636 (2001)

Okazaki, T.: "Impairment of bleomycin-induced lung fibrosis in CD28-deficient mice"J Immunol. 167. 1977-1981 (2001)

Okazaki, T.：“CD28 缺陷小鼠中博莱霉素诱导的肺纤维化受损”J 免疫学杂志。