新規抗アポトーシス遺伝子BSACの機能解析

新型抗凋亡基因BSAC的功能分析

• 批准号: 13216097
• 负责人: 中野 裕康
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216097/
• 关键词: TNF; アポトーシス; BSAC; カスパーゼ; トランスジェニックマウス; ノックアウトマウス; 転写因子; 白血病

BSAC(Basic,SAP,and coiled-coil domain)はTNF誘導性細胞死を抑制することを指標とした機能的なスクリーニングにより我々が同定した新規抗アポトーシス遺伝子である。BSACのアポトーシス抑制のメカニズムを検討したところ、TNFにより誘導されるカスパーゼ3およびカスパーゼ8の活性化を抑制していることが明らかとなった。一方、直接ミトコンドリアに作用しアポトーシスを誘導すると考えられるスタウロスポリンやUV照射によるアポトーシスに対しては抑制効果を認めなかった。またBSACの細胞内局在を検討したところ、主に核に存在していることから、BSACが直接TRADD,FADD、カスパーゼあるいはBcl-2ファミリーに会合することでカスパーゼの活性化を抑制している可能性は否定的であった。BSACが転写の活性化因子で、その結果なんらかの抗アポトーシス遺伝子の発現上昇を介して抗アポトーシス効果を発揮している可能性を考え、酵母の転写因子であるGAL4との融合タンパクを作製し、レポーターアッセイを行ったところ、BSACは著明な転写活性化能を有することが明らかとなった。現在種々のレポーター遺伝子を用い、BSACの標的配列を同定しようと検討中である。さらに生理的な機能を明らかにするためにBSACノックアウトマウスおよびトランスジェニックマウスを作製中であり、現在ターゲテイングベクターの構築は終了し、ES細胞の相同組み換え体のスクリーニング中である。一方トランスジェニックマウスはトランスジーン陽性のラインが4系統得られており、今後mRNAレベルおよびタンパクレベルでのBSACの発現を検討する予定である。さらに最近BSACが、ある種の白血病で見られる染色体転座により生じる融合タンパクの片割れであることが明らかにされ、このことは、我々の初めて明らかにしたBSACの抗アポトーシス機能が白血病発症に関与している可能性を示唆するものである。

BSAC（Basic、SAP 和卷曲螺旋结构域）是一种新型抗凋亡基因，我们通过抑制 TNF 诱导的细胞死亡的功能筛选鉴定出该基因。研究BSAC抑制细胞凋亡的机制，发现BSAC抑制TNF诱导的caspase 3和caspase 8的活化。另一方面，星形孢菌素或紫外线照射被认为是通过直接作用于线粒体来诱导细胞凋亡，但没有观察到对细胞凋亡的抑制作用。此外，当我们检查 BSAC 的细胞内定位时，我们发现它主要存在于细胞核中，这表明 BSAC 通过直接与 TRADD、FADD、caspase 或 Bcl-2 家族结合来抑制 caspase 激活的可能性为负。 。考虑到 BSAC 可能是一种转录激活因子，并因此通过增加一些抗凋亡基因的表达来发挥抗凋亡作用，我们创建了一种与酵母转录因子 GAL4 的融合蛋白，并将其用作报告基因。 BSAC具有显着的转录激活能力。我们目前正在研究使用各种报告基因来鉴定 BSAC 的靶序列。目前我们正在制作BSAC敲除小鼠和转基因小鼠，以进一步阐明其生理功能，目前我们已经完成了靶向载体的构建，目前正在ES细胞中筛选同源重组体。另一方面，我们已经获得了4个转基因阳性小鼠系，我们计划将来在mRNA和蛋白质水平上研究BSAC的表达。此外，最近发现BSAC是在某些类型的白血病中观察到的染色体易位产生的融合蛋白的一半，这表明我们首次发现的BSAC的抗凋亡功能参与了白血病的发生和发展。这表明有可能是白血病。

项目成果

Tada, K.: "Critical Roles of TRAF2 and TRAF5 in Tumor Necrosis Factor-induced NF-κB Activation and Protection from Cell Death"J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Tada, K.：“TRAF2 和 TRAF5 在肿瘤坏死因子诱导的 NF-κB 激活和防止细胞死亡中的关键作用”J Biol Chem. 276. 36530-36534 (2001)

Seino, K.: "Protection against Fas-mediated and tumor necrosis factor receptor 1-mediated liver injury by blockade of FADD without loss of nuclear factor-κB activation"Ann Surg. 234. 681-688 (2001)

Seino, K.：“通过阻断 FADD 来防止 Fas 介导和肿瘤坏死因子受体 1 介导的肝损伤，而不丧失核因子-κB 激活”Ann Surg。

Matsushima, A.: "Essential role of nuclear factor (NF)-κB-inducing kinase and inhibitor of κB (IκB) kinase α in NF-κB activation through lymphotoxin β receptor, but not through tumor necrosis factor receptor I"J Exp Med. 193. 631-636 (2001)

Matsushima, A.：“核因子 (NF)-κB 诱导激酶和 κB (IκB) 激酶 α 抑制剂在通过淋巴毒素 β 受体激活 NF-κB 中的重要作用，但不通过肿瘤坏死因子受体 I”J Exp Med . 193. 631-636 (2001)

Okazaki, T.: "Impairment of bleomycin-induced lung fibrosis in CD28-deficient mice"J Immunol. 167. 1977-1981 (2001)

Okazaki, T.：“CD28 缺陷小鼠中博莱霉素诱导的肺纤维化受损”J 免疫学杂志。