TNFにより誘導される抗アポトーシス遺伝子の同定

TNF诱导的抗凋亡基因的鉴定

• 批准号: 12215145
• 负责人: 中野 裕康
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215145/
• 关键词: TRAF; TNF; ノックアウトマウス; NF-κB; JNK; アポトーシス; Bcl-2; 抗アポトーシス遺伝子

これまでの我々の解析により、TNF receptor-associated factor(TRAF)2/TRAF5ダブルノックアウトマウス(DKO)由来の胎児線維芽細胞(MEF)はTNFによるNF-κBの活性化に障害が認められると同時に、TNF誘導性細胞死に対して感受性が亢進していることが明らかとなった。その分子メカニズムを明らかにするために、まずTNF刺激前後における種々の抗アポトーシス遺伝子の発現をDKO MEFと野性型MEFとで比較検討した。Inhibitor of apoptosis(IAP)ファミリーに属するXIAP,cIAPsやBcl-2,Bcl-x_L,CASH/FLIPなどの遺伝子の発現には両者間で差は認めなかったものの、Bcl-2ファミリーに属するA1/Bfl-1の発現がDKO MEFにおいて著明に低下していた。しかしながら、この遺伝子をレトロウイルスベクターを用いてDKO MEFに遺伝子導入したが、TNF誘導性細胞死に対する抑制効果は不十分であった。そこで、その他の抗アポトーシス遺伝子の存在が十分考えられることより、レトロウイルスベクターで構築したcDNAライブラリーをDKO MEFに遺伝子導入し、TNF存在下で培養することにより、TNF抵抗性となるクローンを選択し、新たな抗アポトーシス遺伝子を同定した。BMS(Biological Modulator of TNF-mediated Signalings)と命名したこの遺伝子は964個のアミノ酸よりなっており、3個のコイルドコイルドメインを有していた。既知の遺伝子とは有意なホモロジーを有しておらず、この遺伝子をDKO MEFに遺伝子導入することにより、DKO MEFに見られたTNF誘導性細胞死を完全ではないものの、抑制することが明らかとなった。現在この遺伝子の機能について解析中である。

我们先前的分析表明，从TNF受体相关因子（TRAF）2/traf5双基因敲除小鼠（DKO）衍生出的胎儿成纤维细胞（MEF）损害了TNF对NF-κB的激活，同时它们对TNF诱导的细胞死亡更容易受到TNF诱导的细胞死亡。为了阐明分子机制，我们首先比较并检查了DKO MEF和野生型MEF之间TNF刺激之前和之后的各种抗凋亡基因的表达。尽管在属于凋亡抑制剂（IAP）家族抑制剂的两个基因（例如XIAP和CIAP）之间没有观察到差异，但在dko MEF中属于BCl-2家族的A1/BFL-1的A1/BFL-1的表达显着降低。但是，使用逆转录病毒载体将该基因转移到DKO MEF中，但是对TNF诱导的细胞死亡的抑制作用不足。因此，足以假设存在其他抗凋亡基因，并通过将用逆转录病毒载体构建的cDNA文库转染到DKO MEF中，在存在TNF的情况下培养，选择了抗TNF的克隆，并确定了新的抗凋亡基因。该基因称为TNF介导的信号（BMS）的生物调节剂，由964个氨基酸组成，并具有三个盘绕螺旋结构域。它与已知基因没有显着的同源性，并将该基因转染到DKO MEF中表明，尽管不完整，但抑制了DKO MEF中TNF诱导的细胞死亡。该基因的功能目前正在分析中。

项目成果

Sanz,L.: "The atypical PKC-interacting protein p62 channels NF-κB activation by the IL-1-TRAF6 pathway."EMBO J. 19 7. 1576-86 (2000)

Sanz, L.：“非典型 PKC 相互作用蛋白 p62 通过 IL-1-TRAF6 途径激活 NF-κB。” EMBO J. 19 7. 1576-86 (2000)

Matsushima,A.: "Essential role of nuclear factor NF-κB-inducing kinase and inhibitor of κB (IκB) kinase α in NF-κB activation through lymphotoxin βreceptor, but not through tumor necrosis factor receptor l."J.Exp.Med.. (in press). (2001)

Matsushima, A.：“核因子 NF-κB 诱导激酶和 κB (IκB) 激酶 α 抑制剂在通过淋巴毒素 β 受体而非肿瘤坏死因子受体 l 激活 NF-κB 中的重要作用。”J.Exp.Med ..（正在出版）（2001）。

Honda,K.: "Molecular basis for hematopoietic/mesenchymal interaction during initiation of Peyer's patch organogenesis."J.Exp.Med.. (in press). (2001)

Honda,K.：“派尔氏集结器官发生过程中造血/间质相互作用的分子基础。”J.Exp.Med..（出版中）。