高電界中のDNA分子の規則的分解の検討

高电场中DNA分子规律分解的研究

基本信息

批准号：
12875016
负责人：
水野彰
金额：
--
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12875016/
关键词：
DNA マイクロマニピュレーション伸長固定高電界誘電泳動力

项目摘要

DNA分子の解析は今まで電子顕微鏡観察、走査プローブ顕微鏡観察を除き、ほとんど液体中で行われている。しかし、気相中・真空中では、遙かに高い移動度が実現できることから、これらの雰囲気中でDNA分子の解析が可能になれば、非常に高速な解析が可能になることが期待される。また、真空中および空気中でDNA1分子を伸ばした状態で針状に固定し、高電圧を印加すれば、電界の集中するDNA分子先端から順次、結合力の弱い箇所が切断され、その断片を解析されれば、1分子レベルでDNA分子の塩基配列を決定できる可能性も秘めている。そこで、本研究では、DNA分子を液体から取り出す方法を確立することを目的とした。そのために、まず、DNA分子との親和力が高いタングステンを電解研磨を用いて加工した微細針電極に高周波電圧を印加することにより、誘電泳動力でT4DNA分子を固定した。そして、高周波電圧の印加を停止し、針電極を固定しているマイクロマニピュレーターを上方向へ操作して、DNA分子を気相中に取り出した。その後、マイクロマニピュレーターを下方向に操作して、針に吸着しているDNA分子を観察したところ、退色は起こしているものの、針電極先端にDNA分子を観察された。このことは針電極に付着したDNA分子は気相中に取り出せたことを示唆している。しかし、この方法ではDNA分子の形態を制御することは困難である。DNAを固定した針電極近傍から溶液を凍結させることにより、凍結溶液中で伸長状態のDNA分子が得られた。今後、この凍結標本を昇華させることにより、伸長されたDNAを気相中に取り出すことが可能になると期待される。

到目前为止，除电子显微镜观察和扫描探针显微镜观察外，对DNA分子进行了分析。然而，在开朗和真空的情况下，预计在这些大气中可以进行DNA分子的分析，因此可以预期在这些大气中可能会出现非常快的分析。此外，如果DNA1分子在真空和空气中扩展，并施加高电压并施加了高电压，则具有弱结合力的零件将与电场浓缩的DNA分子尖端断开，片段。因此，在这项研究中，目的是建立一种从液体中去除DNA分子的方法。因此，通过使用电解抛光，用高频电压施加高频电压，用高频电压施加高频电压，并使用电解抛光剂将T4DNA分子用介电游泳力固定。然后，停止了摩洛尔电压，并将固定针电的微型脱瘤剂向上操作，并在空气相中除去DNA分子。稍后，当微瘤鼻子向下操作并观察到在针中吸附的DNA分子时，尽管引起了褪色，但在针头尖端观察到DNA分子。这表明，附着在气相中的DNA分子可能已在气相中取出。但是，很难用这种方法控制DNA分子形式。通过用固定DNA从针料的附近冷冻溶液，获得了冷冻溶液中的扩展DNA分子。将来，预计该冷冻试样的升华将有可能将延伸的DNA提取到呕吐相中。