光圧力と静電力とを組合せたDNAのマイクロマニピュレ-ション

结合光学压力和静电力进行 DNA 显微操作

基本信息

批准号：
03650347
负责人：
水野彰
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.光学系および電極の作成蛍光顕微鏡に下方よりYAGレ-ザを入射させ、焦点面に直径5μm程度のスポットを作り、光圧力を生じさせた。DNAの蛍光像は高感度SITカメラにて観察した。カメラの前にフィルタを入れ、レ-ザ光(パワ-500mW)は減衰させた。電極はスライドガラスに銅蒸着膜を作り、フォトレジストを用いて作成した。間隔100μmの平行電極系とし、80V,1MHzの高周波電圧を印加した。2.個別DNAの観察DAPI染色により入ファ-ジDNA(約50Kbp)を個々に観察できる。電圧を印加すると丸まっているDNAが伸長するので、これにより個々のDNAであることを確認した。3.個別DNAの選別操作まず、光圧力のみで個々のDNAを捕捉して輸送できるかどうかを調べたが、本実験条件下では不可能であった。しかし、電界が形成されている液体中にレ-ザを照射すると、レ-ザスポットに対し電界と直角方向から入り、平行な方向に出る流れ場が形成できることを見出した。この流れ場はスポット付近の半径10μm程度の局所において形成でき、その速度がレ-ザパワ-および電界強度で制御できるので、この流れ場を用い、一個のDNAを選別・輸送することに成功した。4.DNAの固定・観察用試料の作成直径10μmのタングステン線と、それに平行な蒸着電極を用い、間隔100μmにおいて80Vの高周波電界によりDNAを伸張させつつ、タングステン線を回転させることにより、DNAをタングステン線の表面に付着させることが可能であることを示した。

1。光学系统和电极的制备YAG激光器从下面入射在荧光显微镜上，从而在焦平面上产生直径约为5μm的斑点，从而产生光压。使用高敏感性的SIT摄像头观察DNA的荧光图像。将过滤器放在相机的前面，并衰减激光灯（功率-500MW）。通过在载玻片上形成铜沉积膜并使用光蛋白天仪形成电极。施加了100μm间距的平行电极系统，并施加了80 V和1 MHz的高频电压。 2。单个DNA的观察：DAPI染色允许对注射的Phadi DNA（约50 kbp）进行单独观察。当施加电压时，圆形的DNA会扩展，这证实了它是单个DNA。 3。首先选择单个DNA，我们研究了是否仅通过轻压捕获和运输单个DNA，但这在本实验的条件下是不可能的。但是，已经发现，当激光被照射成形成电场的液体时，可以形成流场，从垂直于电场的方向进入激光点并沿平行于激光位点的方向出口。该流场可以在位置附近的半径约为10μm的局部区域形成，流场的速度可以通过激光功率和电场强度来控制，因此我们成功地使用了该流场来选择和运输单个DNA。 4。创建用于固定和观察DNA的样品，已经证明可以通过使用直径为10μm的钨丝连接到钨导线的表面，并平行于其与其平行的沉积电极，并在80 v处旋转DNA，同时将DNA旋转，同时将DNA伸展，并在80 v space space space上伸展DNA。