光圧力と静電力とを組合せたDNAのマイクロマニピュレ-ション

结合光学压力和静电力进行 DNA 显微操作

基本信息

批准号：
03650347
负责人：
水野彰
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.光学系および電極の作成蛍光顕微鏡に下方よりYAGレ-ザを入射させ、焦点面に直径5μm程度のスポットを作り、光圧力を生じさせた。DNAの蛍光像は高感度SITカメラにて観察した。カメラの前にフィルタを入れ、レ-ザ光(パワ-500mW)は減衰させた。電極はスライドガラスに銅蒸着膜を作り、フォトレジストを用いて作成した。間隔100μmの平行電極系とし、80V,1MHzの高周波電圧を印加した。2.個別DNAの観察DAPI染色により入ファ-ジDNA(約50Kbp)を個々に観察できる。電圧を印加すると丸まっているDNAが伸長するので、これにより個々のDNAであることを確認した。3.個別DNAの選別操作まず、光圧力のみで個々のDNAを捕捉して輸送できるかどうかを調べたが、本実験条件下では不可能であった。しかし、電界が形成されている液体中にレ-ザを照射すると、レ-ザスポットに対し電界と直角方向から入り、平行な方向に出る流れ場が形成できることを見出した。この流れ場はスポット付近の半径10μm程度の局所において形成でき、その速度がレ-ザパワ-および電界強度で制御できるので、この流れ場を用い、一個のDNAを選別・輸送することに成功した。4.DNAの固定・観察用試料の作成直径10μmのタングステン線と、それに平行な蒸着電極を用い、間隔100μmにおいて80Vの高周波電界によりDNAを伸張させつつ、タングステン線を回転させることにより、DNAをタングステン線の表面に付着させることが可能であることを示した。

1。从荧光显微镜的底部创建了YAG LES的光学和电极创建，并且在焦点表面上直径约为5μm的斑点被创建以产生轻压。使用高灵敏度坐姿摄像头观察到DNA的荧光雕像。过滤器放在相机前，Lezo Hikari（Power-500MW）被衰减。电极是使用带有玻璃玻璃中铜蒸气的照片寄存器创建的。将80V，1MHz的高频电压应用于间隔为100μm的平行电极系统。 2。可以通过DAPI染色进入DNA（约50kbp）单独观察单个DNA的观察。当施加电压时，圆形的DNA会延伸，因此已确认它是单独的DNA。 3。首先选择单个DNA的操作，我们检查了是否只能通过摄影捕获单个DNA，但在该实验下是不可能的。但是，发现由电场形成的液体中的辐射可以从正确的角度到电场进入LE点，并在平行方向上形成流动位置。该流动区域可以在该点附近的当地位置形成，约10μm，速度可以通过Le-Za-Pawa和电场强度来控制，因此我们成功地使用此流动位置选择了和运输一个DNA。 4。创建DNA固定 /观察样品创建直径为10μm的10μm钨线，并平行蒸气-in电极，并以100μm的间隔为100μm，通过用高频率扩展DNA来扩展DNA 80V的电场，DNA旋转。