細胞がん化に伴う細胞骨格異常の分子生物学的解析

与细胞癌变相关的细胞骨架异常的分子生物学分析

基本信息

批准号：
63010091
负责人：
矢原一郎
金额：
$ 10.05万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.βおよびγアクチンそれぞれの3′UT領域をプローブとしてそれらの発現を調べ、定常期のL細胞でγアクチンの発現が低いという以前タンパク質レベルで見出したことを確認した。2.酵母βチューブリンのC端27個のアミノ酸を欠損する変異体を人工的に作成したところ温度感受性であった。欠損した部位は酸性アミノ酸に富んでおり、MAPs結合部位の一部をなすと考えられる。3.温度感受性のRSV変異株をニワトリ筋原細胞に感染させ筋細胞分化の系を確立し、ミオシン軽鎖発現をcisに支配する2つの領域を詳細に解析した。4.分裂酵母を用いて、正常なタイミングで染色体が擬縮しスピンドルが形成されるにもかかわらず姉妹染色体分離とスピンドル伸長が阻害される変異体を得た。これをnuc2変異と称し、その産物67Kの蛋白質の性状、分布を明らかにした。5.中間繊維タンパク質ビメンチンとデズミンのAキナーゼおよびCキナーゼによるリン酸化部位を同定した。細胞分裂時の中間繊維構造の脱構築再構成時における同タンパク質リン酸化と比較を行った。6.マウスM1白血病細胞がマクロファージに分化するとき、中間繊維タンパク質ビメンチンが多量に発現することを見いだし、それが転写レベルの発現促進であることを明らかにした。分化にともない中間繊維そのものも電子顕微鏡観察できるようになり、各種オルガネラの配置などに機能しているものと考えられた。7.培養細胞をフォールボールエステルTPAで処理したり、RSVで形質転換させたときに起こる接着装置を構成するタンパク質の変動を明らかにした。8.同じアクチン調節タンパク質族に属するアクチノゲリンとαアクチニンの分子的違いととアクチン超構造への寄与の違いの関係を明らかにした。9.マウスB16黒色腫の転移能に対し抑制的に働くアクチンA^xの分子的性質を明らかにした。

1. 我们以β-和γ-actin各自的3′UT区为探针，研究了它们的表达，并在蛋白质水平上证实了我们之前的发现，即稳定期L细胞中γ-actin表达较低。 2.人工创建的缺乏酵母β-微管蛋白C端27个氨基酸的突变体对温度敏感。删除的位点富含酸性氨基酸，被认为是 MAP 结合位点的一部分。 3.我们通过温度敏感的RSV突变体感染鸡成肌细胞建立了肌细胞分化系统，并详细分析了顺式控制肌球蛋白轻链表达的两个区域。 4.使用裂殖酵母，我们获得了一种突变体，其中姐妹染色体分离和纺锤体伸长受到抑制，即使染色体假收缩和纺锤体形成在正常时间发生。我们将其称为 nuc2 突变，并阐明了其产物 67K 的蛋白质特性和分布。 5.鉴定了中间纤维蛋白vimentin和desmin被A-激酶和C-激酶磷酸化的位点。我们比较了细胞分裂过程中中间纤维结构解构和重组过程中相同蛋白质的磷酸化。 6.当小鼠M1白血病细胞分化为巨噬细胞时，我们发现中间纤维蛋白波形蛋白大量表达，揭示这是由于转录水平上表达的促进所致。随着分化，中间纤维本身现在可以在电子显微镜下观察，并且被认为在各种细胞器的排列中发挥作用。 7. 我们阐明了当培养的细胞用 Fallball 酯 TPA 处理或用 RSV 转化时，构成粘附装置的蛋白质发生变化。 8. 我们阐明了属于同一肌动蛋白调节蛋白家族的actinogelin和α-actinin之间的分子差异及其对肌动蛋白超结构贡献差异之间的关系。 9. 我们阐明了肌动蛋白A^x的分子特性，其抑制小鼠B16黑色素瘤的转移潜力。