がん細胞における細胞骨格の異常

癌细胞的细胞骨架异常

基本信息

批准号：
01015130
负责人：
矢原一郎
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

トリ肉腫ウィルスのがん遺伝子産物pp60^<vーsrc>、ステロイドホルモン受容体、ダイオキシン受容体等は細胞質で熱ショックタンパク質HSP90と複合体を形成している。前年度グルココルチコイド受容体とHSP90の複合体がアクチンに結合することを示したが、本年度はこの結合が特異的であることを次の結果によって示した。先ずこの結合がCa^<2+>・カルモデュリンによって阻害されることを確認した。次に複合体の安定剤モリブデン酸を除き、さらに高塩濃度で抽出することによって、4Sのグルココルチコイド受容体(HSP90から離れた)を得てアクチンとの結合を見たが、結合しなかった。HSP90の作用を介してアクチン繊維と相互作用する機能タンパク質として新たにカゼインキナーゼIIを同定した。これは、ヘパリンによって阻害されるカゼインキナーゼII(CKII)基質特異性を示すキナーゼがHSP90と共に精製されること、および抗HSP90抗体で共免疫沈澱されることによって示された。見かけ上完全精製されたマウスHSP90標品(SDSーPAGEの染色で単一バンド)にも、gamma^^<32>ーPーATPを加えるとHSP90をリン酸化する活性があり、その活性はCKIIの特徴をすべて備えていた。熱ショックや分化誘導剤DMSOによってアクチンと共に細胞質から核内に移行し遺伝子発現の変化やRNAスプライシングの異常に関与する可能性のあるアクチン結合タンパク質コフィリンの機能ドメインの同定を試みた。N端に近い部位にある核移行シグナル様の配列KKRKKの一部又は全部を部位指定突然変異誘導法で改変発現させたところ、この部位は核移行シグナルとして作用する他に、アクチンとの相互作用にも必要であることが明らかになった。

禽肉瘤病毒癌基因产物pp60^<v-src>、类固醇激素受体、二恶英受体等与细胞质中的热休克蛋白HSP90形成复合物。去年我们证明了糖皮质激素受体和HSP90的复合物与肌动蛋白结合，今年我们证明了这种结合是特异性的，结果如下。首先，我们证实这种结合被Ca 2+ 和钙调蛋白抑制。接下来，通过从复合物中除去稳定剂钼酸盐并在高盐浓度下进一步提取，我们获得了4S糖皮质激素受体（与HSP90分离）并检查了其与肌动蛋白的结合，但它没有结合。酪蛋白激酶 II 被新鉴定为一种功能蛋白，可通过 HSP90 的作用与肌动蛋白纤维相互作用。这是通过对具有酪蛋白激酶 II (CKII) 底物特异性的激酶进行共纯化得到的，该激酶被肝素抑制并与抗 HSP90 抗体进行共免疫沉淀。即使是表面上完全纯化的小鼠HSP90制剂(SDS-PAGE染色中的单条带)，当添加γ^^ 32 -P-ATP时也具有磷酸化HSP90的活性，并且该活性与CKII的活性相似。的特点我们试图鉴定肌动蛋白结合蛋白cofilin的功能域，该蛋白通过热休克或分化诱导剂DMSO与肌动蛋白一起从细胞质转移到细胞核，并且可能参与基因表达的变化和异常。 RNA剪接。当我们利用定点突变修饰并表达位于N末端附近的部分或全部核定位信号样序列KKRKK时，我们发现该位点不仅充当核定位信号，而且还与肌动蛋白相互作用。显然这也是必要的。