二種類の発がん物質によるラット大腸発がん感受性遺伝子座の比較

两类致癌物引起的大鼠结肠癌易感位点比较

• 批准号: 12213092
• 负责人: 泉 啓介
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213092/
• 关键词: 大腸発がん; 感受性遺伝子座; LECラット

1)雌F344ラット,雄LECラット各12匹を用いてF1ラットを作製し,最終的に雄(F344xLEC)F2ラット200匹余りを作製した。作製した雄F2ラットに7週齢からMNU(50mg/kg,pH6.0)を週1回腹腔内注射し(計4回),30週後にエーテル麻酔下に屠殺した。全消化管を開き,腫瘍の発生部位,大きさ,数,他臓器の腫瘍を記録した。全ての大腸腫瘍を組織学的に観察し,腫瘍の深達度を検索した。発がん物質投与前に凍結保存しておいた尾からゲノムDNAを抽出し,各染色体上のマイクロサテライトマーカーのうちでF344ラットとLECラットで多型性を示すマーカーを用いて連鎖解析を行っている。次にAOMを用いて同様の研究を行い,MNUの結果と比較する予定である。AOMは15mg/kgを週1回,計5回皮下注射し,36週齢で屠殺する。2)LECラットのMNUおよびAOM誘発大腸発がん高感受性,F344ラットの低感受性の原因を検索するために大腸粘膜の組織学的所見,銅濃度(原子吸光法),BrdU標識率,wesrern blottingおよび免疫組織化学によるCOX-2した。まず,110週齢までの雄LECラット186匹の盲腸を組織学的に検索したところ,4-10週齢の雄LECラットの67%に盲腸潰瘍がみられ,11-70週齢ではその頻度は20%前後であった。それ以降まで生存したラットには盲腸潰瘍はみられなかった。LECラット結腸粘膜にはF344ラットと比べて炎症細胞浸潤の増加,COX-2陽性細胞の増加,BrdU標識率の軽度の上昇がみられた。大腸粘膜の銅濃度には差がみられなかった。今後,1)二種類の発がん物質で発がん感受性(抵抗性)遺伝子座が異なるか否か,2)大腸炎と発がん感受性遺伝子座の関係,を追求する。

1）使用12只雌性F344大鼠和12只雄性LEC大鼠产生F1大鼠，最终产生200多只雄性（F344xLEC）F2大鼠。制备的雄性F2大鼠从7周龄起每周腹腔注射MNU（50 mg/kg，pH 6.0）1次（共4次），30周后乙醚麻醉处死。打开整个胃肠道，记录肿瘤发生的部位、大小、数量以及其他器官的肿瘤情况。对所有结直肠肿瘤进行组织学观察并确定肿瘤浸润深度。从施用致癌剂之前冷冻保存的尾巴中提取基因组 DNA，并使用 F344 和 LEC 大鼠中显示多态性的每条染色体上的微卫星标记进行连锁分析。接下来，我们计划使用 AOM 进行类似的研究，并将结果与​​ MNU 进行比较。 AOM按15 mg/kg皮下注射，每周1次，共5次，36周龄处死动物。 2）结肠粘膜组织学检查、铜浓度（原子吸收光谱法）、BrdU标记率、免疫印迹和免疫学检查，寻找LEC大鼠对MNU和AOM诱导的结肠癌高易感性和低易感性的原因通过组织化学测定F344大鼠的COX-2。首先，对 186 只 110 周龄雄性 LEC 大鼠的盲肠进行组织学检查，发现 4 至 10 周龄雄性 LEC 大鼠中 67% 观察到盲肠溃疡，11 岁雄性 LEC 大鼠中 67% 观察到盲肠溃疡至 70 周约为 20%。在此之后存活的大鼠中没有观察到盲肠溃疡。与F344大鼠相比，LEC大鼠结肠黏膜炎症细胞浸润增多，COX-2阳性细胞数量增多，BrdU标记率轻度升高。结肠粘膜中的铜浓度没有观察到差异。未来我们将研究1）两类致癌物的癌症易感（耐药）位点是否不同，2）结肠炎与癌症易感位点之间的关系。

项目成果

Chone,Y. et al.: "Low susceptibility of Long-Evans Cinnamon rats to N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine-induced urinary bladder carcinogenesis and inhibitory effect of urinary copper."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 16-24 (2000)

乔内，Y.