正常中皮細胞および中皮腫に対するモノクロナール抗体の作製と組織診断への応用

抗正常间皮细胞和间皮瘤单克隆抗体的制备及其在组织诊断中的应用

• 批准号: 61570156
• 负责人: 泉 啓介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570156/
• 关键词: ヒト悪性中皮腫; 中皮細胞; ラット中皮腫; モノクロナール抗体

ヒト悪性中皮腫と肺腺癌の病理組織学的鑑別を行うために, (a)人胸膜悪性中皮腫組織, (b)人正常中皮細胞, (c)自然発生ラット腹膜中皮腫に対するモノクロナール抗体の作製を試みた. ヒト悪性中皮腫は手術例1例(44才, 男), 死後2時間以内の剖検例2例(68才, 女,27才, 男)の合計3例を用いた. これらは病理解剖学的もしくは病理組織学的に悪性中皮腫(ヒ皮型)と確認された. これらの腫瘍組織の新鮮材料および凍結保存材料でBALB/cマウスを3・4回免疫し, ミエローマ細胞(Sp2/0-Ag14)を用いてハイフリドーマを作製した. 最終的に中皮腫および肺癌組織切片(凍結, 緩衝ホルマリン固定)を用いてスクリーニングを行った. 細胞融合は2度試みたが, 中皮腫例に反応し, いずれの腺癌とも反応しないクローンは, 未だ, 得られていない. (b)は非担癌患者の体腔液を低速遠沈後, 日立高速冷却遠心機(SCR20B)を用い, Percollグラジェントを利用して, 中皮細胞を分離して用いた. (c)の自然発生F344ラット腹膜中皮腫は2例得られ, 現在再び, 抗体作製を試みている.なお, 今までに得られた悪性中皮腫生検, 手術例9例, 剖検例9例(うち2例は生検, 手術例にも含まれる. ), 腺癌例10例を用いてサイトケラチン(低分子量型としてPKK1-3, 高分子量型としてEAB903), ビメンチン, CEA(M006)の免疫組織化学的検索を試みた(泉ら, 日本癌学会総会記事 pp.587,1987). PKK1は中皮腫, 腺癌のいずれも陽性(剖検例は7/9)を示すが, EAB903は中皮腫では8/9腺癌では6/10が陽性で, 両者の鑑別には成り得ず, monoclonal CEAは, 中皮腫では全例陰性, 腺癌手術例では, 7/10に陽性であり, これらのモノクロナール抗体の組み合わせで, ある程度補助診断が可能であることが確認できた.

为了对人恶性间皮瘤和肺腺癌进行组织病理学区分，我们分析了（a）人胸膜恶性间皮瘤组织，（b）人正常间皮细胞，和（c）自发性大鼠腹膜间皮瘤。我们试图产生针对人恶性间皮瘤的单克隆抗体。 1例人类恶性间皮瘤接受手术（44岁，男性），2例死亡后2小时内尸检（68岁，女性，27岁，使用解剖学或组织病理学证实为恶性间皮瘤（癌型）的总共3例BALB/c小鼠，免疫3或4次，并使用骨髓瘤细胞（Sp2/0-Ag14）产生杂交瘤。 ）。最后，使用间皮瘤和肺癌组织切片（冷冻，固定在缓冲福尔马林中）进行筛查。尽管我们尝试了两次细胞融合，但我们尚未获得与间皮瘤病例发生反应但不与任何腺癌发生反应的克隆。（b）显示了来自非肿瘤患者的体腔液在低速离心后的结果。使用日立高速冷冻离心机（SCR20B）使用Percoll梯度分离间皮细胞，获得了（c）中自然发生的F344大鼠腹膜间皮瘤的两例，目前正在对其进行再次治疗。我们正在尝试生产抗体。到目前为止，我们已经获得了9例恶性间皮瘤活检和手术，9例尸检（其中2例也包括在活检和手术病例中），以及腺癌的细胞角蛋白免疫组化搜索。使用10个病例尝试了PKK1-3（低分子量型）、EAB903（高分子量型）、波形蛋白和CEA（M006）（Izumi等，2017）。日本癌症协会大会文章第 587 页，1987 年），PKK1 在间皮瘤和腺癌中均呈阳性（7/9 尸检病例），但 EAB903 在 8/9 例间皮瘤中呈阳性，在 10 例腺癌中呈阳性。由于单克隆 CEA 在所有间皮瘤病例中呈阴性，而在 7/10 的腺癌手术病例中呈阳性，因此无法区分两者。已证实这些单克隆抗体的组合可以提供一定程度的辅助诊断。