マウス初期胚母性RNAの時期特異的ポリ(A)鎖伸長の意義

小鼠早期胚胎母体RNA阶段特异性多聚A链延长的意义

• 批准号: 12029221
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12029221/
• 关键词: マウス; 着床前初期胚; 卵形成; 受精卵; 母性RNA; 接合型遺伝子発現; poly(A)化; 翻訳制御

受精前後で発現する遺伝子群の研究の過程で単離した新規遺伝子のSSEC-D cDNA(stage specific embryonic clone-D)の解析から、その母性mRNAは1細胞期後期(受精後18時間)をピークとして一過的にmRNAのポリA鎖を伸長させていることと、この伸長には未知のcis配列が利用されていることを見いだした。マウスでは受精後ポリ(A)鎖を伸長する母性RNAの報告は無い。本研究の目的は、我々が見いだした受精後に生じる母性RNAのポリ(A)鎖伸長現象が、マウス初期胚発生プログラムにいかに関与するかを解明することである。本年度、この伸長に関わる未知のcis配列の同定に向け、EGFPcDNAおよび各鎖長のポリ(A)を持つ一連の融合SSEC-DRNAをマウス受精卵細胞質へ注入する実験を行い、幾つかの知見を得た。先ず、注入RNAは受精卵に本来存在するSSEC-D母性RNAと同様にRNA伸長を示し、注入実験系をほぼ確立できた。この系を駆使し、受精後に生じる母性RNAのポリA鎖伸長現象には、(i)SSEC-D配列および45ntds以上の3′末端のpoly(A)鎖の存在が必要であること。(ii)特定のSSEC-D配列の欠損したRNA注入実験から、SSEC-DのRNA配列中の特定の配列に依存していることを示した。さらに、3末端のpoly(A)鎖とSSEC-DのRNA配列中の特定の配列がRNA安定性に関与することを見いだし、EGFPの注入胚での発現から、3′末端のpoly(A)鎖の存在、もしくはpoly(A)鎖の伸長が翻訳活性への影響する可能性が認められた。これらの一連の結果から、ダイナミックな変動を示す母性型SSECDmRNAの動態に関するRNAシスシグナルおよびトランス因子の同定のための研究へ進展させるための足がかりが出来たと考える。

对在受精前和之后表达的基因组分离的新基因SSEC-D cDNA（阶段特异性胚胎克隆D）的分析表明，一个细胞的后期孕妇mRNA峰（受精后18小时）（在受精后18小时），并且该扩展中使用了未知的CIS序列。在小鼠受精后，没有关于母体RNA延长聚（A）链的报道。这项研究的目的是阐明我们在早期的胚胎发育计划中发现的孕产妇RNA的poly（a）链延伸。今年，为了确定该扩展中涉及的未知顺式序列，我们进行了一个实验，其中将EGFP cDNA和一系列含有每个链长的聚（A）的融合SSEC-DRNA注入了小鼠受精卵的细胞质中，并获得了一些发现。首先，注入的RNA显示出类似于最初存在于受精卵中的SSEC-D母体RNA，几乎是注射实验系统的建立。使用该系统，在受精后发生的母体RNA的Polya链扩展现象需要（i）（i）（i）在45 NTD或更多的3'末端的SSEC-D序列和Poly（a）链的存在。 （ii）缺少特定SSEC-D序列的RNA注射实验表明它们取决于SSEC-D的RNA序列中的特定序列。此外，我们发现3端聚（A）中的特定序列与SSEC-D RNA序列参与RNA稳定性，并且在注射的胚胎中表达EGFP的表达揭示了3'-末端poly（A）链的存在可能会影响翻译活性。这些系列结果提供了一个垫脚石，可以提高对RNA CIS信号的识别和有关母体SSECD mRNA动力学的跨因素的研究。

项目成果

M.Shoji, et al.: "Age-related amyloid b protein accumulation induces cellular death and macrophage activation in transgenic mice."J.Pathol.. 191. 93-101 (2000)

M.Shoji 等人：“与年龄相关的淀粉样蛋白 b 蛋白积累会诱导转基因小鼠的细胞死亡和巨噬细胞活化。”J.Pathol.. 191. 93-101 (2000)

Sadahiro,S., et al: "Morphometric Analysis of the Myelin-Associated Oligodendrocyte Basic Protein-Deficient Mouse Reveals a Possible Role for Myelin-Associated Oligodendrocytis Basic Protein in Reguiating Axonal Diameter"Neuroscience. 98. 361-367 (2000)

Sadahiro,S. 等人：“髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白缺陷型小鼠的形态测量分析揭示了髓磷脂相关少突胶质细胞碱性蛋白在调节轴突直径中的可能作用”神经科学。

Kajiwara,K., et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embyogenesis"Genes to Cells (2001). (in press).

Kajiwara,K., et al.：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells (2001)。

M.Sato,T. et al.: "Enhanced green fluorescent protein as a useful tag for rapid identification of homozygous transgenic mice."Genetic Anal : Biomol. Engineer.(2000). (in press).

佐藤先生，T.

Sato,M. et al.: "New Approach to Cell Lineage Analysis in Mammals Using Cre-loxP System."Molecular Reproduction and Fertility. 56. 34-44 (2000)

佐藤，M.