マウス初期胚における母性RNA情報の伝達と消長

早期小鼠胚胎中母体RNA信息的传递和命运

• 批准号: 10174226
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174226/
• 关键词: 遺伝子発現; マウス受精卵; 母性RNA; poly A; CPE; Cytoplasmic Polyadenylation; Polyadenylation; RNA鎖伸長

本研究では、実施計画に従い以下の成果を得た。(1) 鎖長の伸長・短縮の実体を塩基配列レベルで明らかにする新たな方法として、RNA鎖の3'末端に合成オリゴリボヌクレオチドをT4RNAリガーゼにより直接付加した後、逆転写反応とPCRにより、SSEC-DRNAの3'領域を増幅し、この増幅産物を直接に塩基配列決定するという方法に挑戦した。これにより、SSEC-DRNAの3'末端領域に約370個のアデニンに相当するピークが得られた。母性型SSEC-DmRNAには元来100ヌクレオチド程度のpoly(A)鎖がついており、これが受精後さらに300ヌクレオチド程度伸長されることにより鎖長が増大しているものと考えられた。しかし、この300ヌクレオチド内には他の塩基が挿入されている可能性もあり、今後明らかにするべき課題と考える。(2) 接合子型mRNAの合成をα-Amanitinによって阻害する、あるいは受精後のDNA合成をAphidico1inにより阻害した実験では、薬剤を添加しない場合と同様に母性型SSEC-DmRNAが1-2細胞期に伸長した後、短縮し、その後分解されることを観察したが、シクロへキシミドを添加した場合は、伸長が直ちに停止し、このRNAサイズの変化はタンパク質の合成が必要であることが判明した。未受精卵でも受精の刺激なしに基本的に同様の変化が見られることから、今後このRNA長変化に関わるcis elementとtrans acting factorを明らかにするとともに、その生物学的意義を明らかにしていきたい。

本研究按照实施方案，取得了以下成果。 （1）作为在碱基序列水平上阐明链长延长和缩短实质的新方法，使用T4 RNA连接酶将合成的寡核糖核苷酸直接添加到RNA链的3'末端，然后进行反转录和PCR我们尝试扩增SSEC-DRNA的3'区域并直接对扩增产物进行测序。结果，在SSEC-DRNA的3'末端区域获得了对应于约370个腺嘌呤的峰。母本型SSEC-D mRNA原本具有约100个核苷酸的多聚(A)链，并且认为受精后链长通过进一步延伸约300个核苷酸而增加。然而，这300个核苷酸内有可能插入了其他碱基，这是一个将来应该澄清的问题。 (2)在用α-鹅膏蕈素抑制受精卵型mRNA合成或用Aphidicico1in抑制受精后DNA合成的实验中，母本型SSEC-D mRNA与没有使用的情况一样保持在1-2细胞阶段。我们观察到RNA被延长、缩短，然后被降解，但是当添加放线菌酮时，延长立即停止，表明RNA大小的这种变化需要蛋白质合成。由于在没有受精刺激的未受精卵中也观察到了基本相同的变化，因此我们将继续阐明参与这种RNA长度变化的顺式元件和反式作用因子，并阐明它们的生物学意义。

项目成果

Shiina,T.,Kimura,M.et al.: "Physical mapping between the S and IILA-E genes in the human MIIC class region;construction of a BAC,PAC and cosmid contig." Immunogenetics. 48. 402-407 (1998)

Shiina,T.,Kimura,M.等人：“人 MIIC 类区域中 S 和 IILA-E 基因之间的物理作图；BAC、PAC 和粘粒重叠群的构建。”

Chen,L.,Kimura,M.et al.: "Molecular cloning of a leucine zipper motif-containing novel cDNA specifically expressed in adult mouse t4estie." DNA Sequence. 9. 101-108 (1998)

Chen,L.,Kimura,M.等人：“在成年小鼠 t4estie 中特异性表达的含有亮氨酸拉链基序的新型 cDNA 的分子克隆。”

Kimura,M.,Sato,M.et al.: "Overexpression of a Minor Component of Myclin Basic Protein Isoform(17.2kDa)can Restore Myclinogencsis in Transgenic Shiverer Mice." Brain Research. 785. 245-252 (1998)

Kimura,M.,Sato,M.等人：“Myclin 碱性蛋白异构体 (17.2kDa) 的次要成分的过度表达可以恢复转基因 Shiverer 小鼠的 Myclinogencsis。”

Miyado,K.,Kimura,M.et al.: "Differential Expression of mRNAs for M31 and M32,Murine IIomologues of Drosophilla IIeterochromatin Protein 1(HP1),During Murine Embryogenesis." Biochem.and Molec.Biol.Int.44. 1051-1058 (1998)

Miyado,K.、Kimura,M.等人：“果蝇 II 异染色质蛋白 1 (HP1) 的小鼠 II 同源物 M31 和 M32 mRNA 的差异表达，在小鼠胚胎发生过程中。”

Taniguchi,Y.,Kimura,M.et al.: "Nucleotide Sequence of the Ring3 Gene in the ClassII Region of the Mouse MHC and Its Abumdant Expression in Testicular Germ Cells." Genomics. 51. 114-123 (1998)

Taniguchi,Y.,Kimura,M.等人：“小鼠 MHC II 类区域中 Ring3 基因的核苷酸序列及其在睾丸生殖细胞中的丰富表达”。