マウス初期胚におけるmRNA情報の変化とその制御

小鼠早期胚胎mRNA信息变化及其调控

• 批准号: 09278225
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278225/
• 关键词: SSEC-D; マウス; 初期胚; 遺伝子発現; 母性RNA; 転写後調節; 接合子型RNA

平成9年度は計画に従って研究が実施されたが,新しい発見により項目2,3,4より5に重点を置いた研究を行った.1.SSEC-D全長cDNAの単離.ほぼ全長のcDNAをマウス胚性幹細胞のcDNAライブラリーより単離した.125アミノ酸をコードする領域は予測できるが,ペプチドのモチーフは見いだされず機能は未知である.2.抗体の作成と抗体を用いたタンパク質発現解析.本年度は抗体作成の為に種々のcDNA断片を結合し,大腸菌で目的のタンパク質を発現する系を確立した.3.3'-UTR領域に結合するタンパク質の単離.酵母のtwo-hybrid systemの基礎固めを行った.4.RNA注入による発現解析.in vitroで合成した大腸菌βgal遺伝子との融合RNAを受精前後のマウス卵に注入を行った結果,接続するSSEC-D RNAの部分により,βgalの活性に違いがあるようであったが,この実験系は定量性,RNAの安定性等に問題があることに気づいた.5.SSEC-D RNAの受精に伴う変化(1)SSEC-D RNAは受精後15時間前後に一過性に伸長するが,このSSEC-D maternal RNAは2細胞期後期頃から再び短縮,分解することが判明した.これは検出感度の改良を行った結果,30個程度の受精卵の全RNAを用いてNorthern Blottingが実施できるようになったことによる.(2)この伸長は3'末端へのA-richな配列の付加によることを証明し,(3)この伸長,短縮,分解の過程が,受精後に起こる新たなDNA複製やmRNA合成を必要としない自律的な変化であることを明かにした.このSSEC-D RNAの動態は,マウス受精卵における母性RNAから接合子型RNAへの転換に深く関わる一般的な現象と見ており,今後この自律的プログラムを分子レベルで明かにすることが重要である.

研究按照1997年的计划进行，但由于新的发现，研究集中在第5项，而不是第2、3和4项。 1.从cDNA文库中分离SSEC-D全长cDNA。虽然可以预测编码125个氨基酸的区域，尚未发现潮汐基序，其功能未知。 2. 抗体的创建和使用抗体的蛋白质表达分析 今年，我们将开发一个系统，将各种 cDNA 片段组合起来以创建抗体并在大肠杆菌中表达目标蛋白质。 3.分离与3'-UTR区域结合的蛋白质。酵母二杂交4. 通过RNA注射进行表达分析 将体外合成的大肠杆菌βgal基因的融合RNA注射到受精前后的小鼠卵子中，结果发现，虽然似乎存在着表达差异。由于βgal活性的差异，我们注意到该实验系统在定量性能、RNA稳定性等方面存在问题。 5. SSEC-D RNA与受精相关的变化（1）SSEC -D尽管RNA在受精后15小时左右短暂延长，但发现该SSEC-D母体RNA从两细胞阶段后期开始再次缩短和降解。这是由于使用来自约30个受精卵的总RNA提高了检测灵敏度。 , 北部(2)已证明这种伸长是由于在3'末端添加了富含A的序列，并且(3)这种伸长、缩短和分解的过程发生在受精后。 D是一种自主变化，不需要新的DNA复制或mRNA合成。 RNA的动力学被视为一种普遍现象，与小鼠受精卵中从母体RNA到合子RNA的转变密切相关，未来在分子水平上阐明这种自主程序将非常重要。