マウス初期胚発生における母性RNAのStage-specificな構造的変化

小鼠早期胚胎发育过程中母体 RNA 的阶段特异性结构变化

• 批准号: 11155223
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155223/
• 关键词: マウス; 初期胚; 母性RNA; 卵母細胞; 遺伝子発現; ポリA付加; 飜譯制御

本研究では我々が単離した遺伝子SSEC-Dが母性RNAとして発現しながら,受精後一過性に高分子化する(300ntds)という現象を手がかりに,哺乳類における受精後の個々の母性RNAの消長と接合子型RNAの発現に関わるRNA情報の動態と変化の分子的基盤を明らかにすることを最終目的とする.11年度の研究計画にしたがって報告する1.初期mRNAの動態を司るシスアクティングRNA配列大子の同定・解析変異型RNAの初期胚注入およぴトランスジェニックマウスの作製後,ノザン法や,リアルタイムPCRを用いたcDNA定量法,RNA-ligase mediated 3' RACE法RNA-ligase mediated 3'RACE法を用い,polyAの伸長・短縮・分解反応を支配するSSEC-DRNA上の配列を解明する予定であったが、合計5系統のトランスジェニックマウスを作製することに成功した。普遍性の検討のために,同様の挙動を示す他のマウス初期胚mRNAについての解析やアフリカツメガエルの卵母細胞を用いた解析も準備中である.2.初期胚mRNAの構造変化の生物学的意味の解明1と同様の発生工学的手法により,鎖長変化が,RNA分子の安定性,及ぴ,それからの翻訳効率に及ぽす影響をlacZあるいはGFPといったマーカーを併用して測定するための予備実験を開始した.とくにこの研究では,高感度の分子生物学的手法と発生工学的手法が重要であり、現在10個程度のマウス初期胚で検出可能な系を確立した.

在这项研究中，我们以我们分离的基因SSEC-D在受精后表达为母体RNA但短暂变成聚合物（300 ntds）的现象为线索，探讨了个体母体RNA在受精后的命运和命运。阐明与受精卵型 RNA 表达相关的 RNA 信息动态和变化的分子基础。最终目标是根据2011财年的研究计划进行报告。 1. 控制早期mRNA动态的顺式作用RNA序列的鉴定和分析 突变RNA的早期胚胎注射和转基因小鼠的产生 之后，Northern方法，使用实时 PCR、RNA 连接酶的 cDNA 定量方法介导的3'RACE方法RNA连接酶介导的3'RACE方法计划阐明SSEC-DRNA上控制polyA的延伸、缩短和降解反应的序列，但总共使用了5个品系的转基因小鼠。创造它。为了检验普遍性，我们还准备对表现出类似行为的其他早期小鼠胚胎 mRNA 进行分析，并使用非洲爪蟾卵母细胞进行分析。 2. 早期胚胎 mRNA 结构变化的生物学 使用与 1 中使用的类似的发育工程方法，链长。变化可用于提高RNA分子的稳定性。我们还开始了初步实验，使用lacZ或GFP等标记来测量这对翻译效率的影响。特别是，这项研究将利用高度敏感的分子生物学方法和发育工程方法，这一点很重要，我们现在已经建立了一个系统。可以在大约 10 个早期小鼠胚胎中检测到它。