マウス初期胚発生における母性RNAのStage-specificな構造的変化

小鼠早期胚胎发育过程中母体 RNA 的阶段特异性结构变化

• 批准号: 11155223
• 负责人: 木村 穣
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155223/
• 关键词: マウス; 初期胚; 母性RNA; 卵母細胞; 遺伝子発現; ポリA付加; 飜譯制御

本研究では我々が単離した遺伝子SSEC-Dが母性RNAとして発現しながら,受精後一過性に高分子化する(300ntds)という現象を手がかりに,哺乳類における受精後の個々の母性RNAの消長と接合子型RNAの発現に関わるRNA情報の動態と変化の分子的基盤を明らかにすることを最終目的とする.11年度の研究計画にしたがって報告する1.初期mRNAの動態を司るシスアクティングRNA配列大子の同定・解析変異型RNAの初期胚注入およぴトランスジェニックマウスの作製後,ノザン法や,リアルタイムPCRを用いたcDNA定量法,RNA-ligase mediated 3' RACE法RNA-ligase mediated 3'RACE法を用い,polyAの伸長・短縮・分解反応を支配するSSEC-DRNA上の配列を解明する予定であったが、合計5系統のトランスジェニックマウスを作製することに成功した。普遍性の検討のために,同様の挙動を示す他のマウス初期胚mRNAについての解析やアフリカツメガエルの卵母細胞を用いた解析も準備中である.2.初期胚mRNAの構造変化の生物学的意味の解明1と同様の発生工学的手法により,鎖長変化が,RNA分子の安定性,及ぴ,それからの翻訳効率に及ぽす影響をlacZあるいはGFPといったマーカーを併用して測定するための予備実験を開始した.とくにこの研究では,高感度の分子生物学的手法と発生工学的手法が重要であり、現在10個程度のマウス初期胚で検出可能な系を確立した.

这项研究使用了我们将基因SSEC-D的现象分离为母体RNA，并在受精后（300 NTD）在瞬时聚合现象（300 NTD）（300 NTD）（300 NTD）中瞬时大分子（300 NTD），最终目的是阐明与RNA相关的分子基础的动力学效果，并在RNA的分子基础上进行了效率。合子RNA。根据2011年的研究计划报告。鉴定和分析了控制早期mRNA动力学的Cisacting RNA序列。将早期胚胎注入突变型RNA并产生转基因小鼠后，我们使用实时PCR，RNA-LIGASE介导的3'种族方法使用北部方法和cDNA定量。使用3'race方法，我们计划阐明控制Polya的延伸，缩短和降解反应的SSEC-DRNA上的序列，但我们能够总共产生五只转基因小鼠。为了研究普遍性，还准备了对使用异爪蟾卵母细胞表现出相似行为和分析的其他早期胚胎胚胎mRNA的分析。2。早期 - 胚胎mRNA 1和类似的发育工程技术中结构变化的生物学变化的再启动已经开始进行初步实验，以衡量使用诸如LACZ或GFP等标记的RNA分子的链长度变化对稳定性的影响以及RNA分子的翻译效率。特别是，高度敏感的分子生物学方法和发育工程方法很重要，并且已经建立了大约10个早期胚胎胚胎中可以检测到的系统。