ヘパリン結合性成長因子ミッドカインの活性抑制とその医学的応用

肝素结合生长因子中期因子活性的抑制及其医学应用

基本信息

批准号：
00J04272
负责人：
武井佳史
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト・ミッドカイン合成を抑制するアンチセンス・オリゴの作製と癌治療への応用に関する研究ヘパリン結合性成長因子ミッドカイン(Midkine, MK)は細胞をトランスフォームし、線溶系の亢進や血管新生作用を有することから、MKが癌の発生や進展に関与していると考えられた。そこでMK活性を阻害するアンチセンス・オリゴを作製し、これを用いた癌治療への応用性を検討した。マウスMKに対するアンチセンス・オリゴについては、すでに論文発表(Y.Takei et al. Cancer Res. 61,8486-8491:2001)済みなので今回、ヒトMKの合成を阻害する新規アンチセンス・オリゴ(ホスホロチオエート骨格およびモルフォリノ骨格を有する2種)の開発を行い、以下に示すような知見を得た。(1)すでにマウスMK合成を阻害可能なアンチセンスDNAの開発に成功しているので、マウスMKにおける標的部位を参考にして、ヒトMK合成を阻害可能なホスホロチオエート型アンチセンスDNA(MK AS-h01)を合成した。合成したオリゴDNAをMKを培養上清中に分泌しているヒト前立腺癌細胞(PC-3)に投与した。遺伝子導入剤として陽イオン性リポソーム試薬、リポフェクトアミン-プラスを用いた。その結果、MK AS-h01投与によってPC-3のMK合成が有意に抑制されることが明らかとなった。センス配列を有するコントロールは効果がなかった。(2)昨年度から開発を行ってきたMK Morpholino ASをPC-3細胞に投与すると、同細胞のMK合成量が減少し、かつin vitroにおける同細胞の増殖能力も減少することが明らかとなった。PC-3をヌードマウス皮下に移植して作成した腫瘍に、MK Morpholino ASを注入すると腫瘍の増大が有意に抑制された。MKを分子標的とした新たな癌治療法の可能性を明示する結果と考えられた。

关于抑制人中酮合成和癌症治疗中肝素结合生长因子中风（MK）的生产的反义寡聚的研究研究会改变细胞，并增强了纤维蛋白水解系统和新血管作用，使MK认为MK参与癌症的发育和发育。因此，制备了抑制MK活性的反义寡素，并研究了其在癌症治疗中的应用。关于小鼠MK的反义寡聚，已经发表了一篇论文（Y.Takei等人CancerRes。61,8486-8491：2001），因此我们开发了一种新颖的反义寡核能（两种具有磷酸胸酯骨架和摩pholino骨架的类型），可抑制人类Mk的合成，并抑制了MK的合成，并发现了以下发现。（1）由于已经成功开发了能够抑制小鼠MK合成的反义DNA，因此使用小鼠MK中的靶位点合成了能够抑制人MK合成的磷酸硫酸盐反义DNA（MK AS-H01）作为参考。将合成的寡素化施用到人类前列腺癌细胞（PC-3），将MK分泌到培养物上清液中。作为基因转移剂，使用了阳离子脂质体试剂，脂肪系胺 - 甲状腺素。结果，发现MK AS-H01的给药可显着抑制PC-3中MK的合成。具有感官序列的控件无效。（2）已经揭示了自去年以来一直在开发到PC-3细胞的MK Morpholino AS时，同一细胞中的MK合成量也会降低，并且同一细胞在体外增殖的能力降低。通过将PC-3皮下植入裸鼠植入PC-3产生的肿瘤中，将MK变形释放注射为肿瘤的生长显着抑制。这被认为是清楚地证明使用MK作为分子靶标的新癌症治疗的可能性。